转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物（一般是尼龙膜）上固定，是进行各种后续研究（如RFLP分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究）的前提。

实验目的：

掌握Southernblotting的原理及操作步骤。

实验原理：

1.转膜的方式：
　　向上的毛细管转移
　　向下的毛细管转移
　　同时向两张膜转移
　　电转移
　　真空转移

2.固相支持物的种类及选择：
　　硝酸纤维素膜：非共价结合，易脆，易丢失DNA，<500bp的DNA无效，转膜前的工作（从提高转膜效率,利于转膜后使用等）。
　　尼龙膜（带正电荷的）：高强度，不易破损，具有较大的DNA结合容量，它能够吸附变性DNA，核酸以共价结合方式不可逆的结合在尼龙膜上。尼龙膜两边均有同样吸附DNA功能，无论用哪边均可以经久耐用，可反复利用10次以上（10-20次），经毛细管（毛细吸附）作用，把DNA从凝胶上转到膜上。DNA转到膜上是复制胶上的带型，在80-100℃真空干燥2-4hrs，即可固定DNA。

3.转移缓冲液（transferbuffer）的选择： 
　　带正电荷的尼龙膜：可用高盐离子强度（SSC），但不能充分发挥膜潜能；0.4NNaOH，共价结合DNA是最大优点。
　　硝酸纤维膜：高盐离子强度促进DNA与膜结合（20×SSC），低盐离子强度导致小片段DNA在转移过程中丢失，pH>9，DNA不能与膜结合。

4.转膜时间（durationoftransfe）约12hrs
　　取决于毛细管系统，DNA大小，胶厚度（＜5mm）及浓度（＜1%）。DN分子量A大小决定时间长短，部分去嘌呤减小DNA，碱转移2hrs大部分结合到膜。DNA转移的效率较难判断，只有在转膜结束后，通过EB染色及分子杂交才可以鉴别效率高低，但已无补救措施，因此，每一步应严格操作。

实验材料及试剂：

酶消化好的DNA样品，尼龙膜，0.2NHCl，0.4NNaOH等。

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