实验仪器：电泳仪电泳槽血清加样带分光光度计滤纸剪刀

实验材料：醋酸纤维素膜规格2×8cm。

实验试剂：

l.巴比妥－巴比妥钠缓冲液（PH8.6＋0.1.离子强度0.06）：称取巴比妥2.21g，巴比妥钠12.369于500ml蒸馏水中，加热溶解，待冷至室温后，再用蒸馏水补充至于1L。

2.氨基黑10B染色液：称取氨基10B0.1g，溶于无水乙醇20ml中，使溶解。另取磺基水杨酸2.5g，溶于74.5ml蒸馏水中，再将二液混合摇匀。

3.漂洗液：甲醇45ml，冰醋酸5ml和蒸馏水50ml，摇匀．

4.0.4M氢氧化钠溶液。

实验操作：

1.将缓冲液加入电泳槽内，调节两侧槽内的缓冲液，使其在同一水平面上。

2.醋纤膜的准备：取在缓冲液中浸泡的醋纤膜一张，在毛面的一端（负极侧）1.5厘米处，用铅笔画一横线，作点样标记，编号后，将醋纤膜置于巴比妥－巴比妥钠缓冲液中浸泡，待充分浸透后取出（一般为二十分钟）夹于洁净滤纸中间，吸去多余的缓冲液。

3.将醋纤膜毛面向上贴于电泳槽的支架上拉直，用微量吸管吸取无溶血血清在横线处沿横线加3－5微升。样品应与膜的边缘保持一定距离，以免电泳图谱中蛋白区带变形，待血清渗入膜后，反转醋纤膜，使光面上平直地贴于电泳槽的支架上，用双层滤纸或四层纱布将膜的两端与缓冲液连通，稍待片刻．

4.接通电源，注意醋纤膜上的正负极，切勿接错．电压90－150伏，电流0．4－0.6mA/cm宽（不同电泳仪所需电压.电流可能不同，应灵活掌握）；夏季通电45分钟，冬季通电60分钟，待电泳区带展开约25－35mm。，即可关闭电源。

5.染色：通电完毕，取下薄膜直接浸于氨基黑10B染色液中，染色5－10分钟（以白蛋白染透为止），然后在漂洗液中漂去剩余染料，直至背景无色为止。

6.定量：将漂洗净的薄膜吸干，剪下各染色的蛋白区带放入相应的试管内，在白蛋白管内加0.4M氢氧化钠溶液6ml（计算时吸光度乘2），其余各加3ml，振摇数次，置37度水箱20分钟，使其染料浸出.对于浸出的氨基黑10B，用分光光度计，在波长600－620nm读取各管吸光度，然后计算各自的含量（在醋纤膜的无蛋白区带部分，剪一条与白蛋白区带同宽度的膜条，作为空白对照）．

计算：

各组分蛋白％=Ax／At×100％

各组分蛋白g/L＝各组分蛋白百分数×血清总蛋白g/L

AX表各组分蛋白吸光度At表各组分蛋白吸光度总和

参考值：