实验原理 琼脂糖（agarose）是经过挑选，以质地较纯的琼脂（agar）作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖，它具有离子交换性质，这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多糖，它由D－半乳糖和3,6－脱水－L－半乳糖的残基交替排列组成。 琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大（98－99%），近似自由电泳，因为固体支持物的影响少，故电泳速度快，区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响很少，是一种较好的电泳材料，分离效果较好。 血清中脂类物质与血清载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白（lipoprotein）形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类及数量不同，各种脂蛋白颗粒大小也相差很大，因此，以琼脂糖凝胶为支持物，在电场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。 琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑（或油红等）进行预染。再将预染过的血清加样于琼脂糖凝胶板加样槽中，通电后可以看到脂蛋白向正极移动，并分离出几个区带。正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从阴极到阳极依次为 －脂蛋白（最深），前 －脂蛋白（最浅）及 －脂蛋白（比前 －脂蛋白略深些），在原点处应无乳糜微粒。有时前 －脂蛋白也显示不出来。 琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大（98－99%），近似自由电泳，因为固体支持物的影响少，故电泳速度快，区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响很少，是一种较好的电泳材料，分离效果较好。 血清中脂类物质与血清载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白（lipoprotein）形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类及数量不同，各种脂蛋白颗粒大小也相差很大，因此，以琼脂糖凝胶为支持物，在电场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。 琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑（或油红等）进行预染。再将预染过的血清加样于琼脂糖凝胶板加样槽中，通电后可以看到脂蛋白向正极移动，并分离出几个区带。正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从阴极到阳极依次为 －脂蛋白（最深），前 －脂蛋白（最浅）及 －脂蛋白（比前 －脂蛋白略深些），在原点处应无乳糜微粒。有时前 －脂蛋白也显示不出来。 1. 苏丹黑染色液 将苏丹黑B加到无水乙醇中至饱和，摇荡使乙酰化。用前过滤。2. 巴比妥缓冲液 称取巴比妥钠15.4g、巴比妥2.76g及EDTA0.29g，加水溶解后再加蒸馏水至1000mL（pH为8.6，离子强度0.075），为电极缓冲液。3. 凝胶缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷1.212g、EDTA0.29g及NaCl5.85g，用蒸馏水溶解后，稀释至1000mL，pH为8.6。4. 琼脂糖凝胶 称取琼脂糖0.45 g溶于50 mL凝胶缓冲液中，再加水50 mL。在水浴中加热至沸，待琼脂糖完全溶解后，立即停止加热。 1. 预染血清 血清0.2mL中加苏丹黑染色液0.2mL，混合置37℃水浴中染色30分钟，离心（2000转/分）约5分钟。以除去悬浮于血清中染料沉渣。2. 制备琼脂糖凝胶板 将已配制好的0.5%琼脂糖凝胶于沸水浴中加热融化，用吸管吸取凝胶溶液浇注在载玻片上，约3 mL。静置半小时后凝固（天热时需延长，也可放入冰箱中数分钟以加速凝固）。3. 点样 将剪好的滤纸条对折，以折边在距凝胶一端2cm处切一点样口。将毛细管插入预染好的血清中，待吸入部分血清后，取毛细管使其有样品的一端靠于点样口端部，停靠3秒左右。4. 电泳 将凝胶板平放入电泳槽中，使加样端接在阴极一侧，用四层滤纸或纱布做成 引桥 ，敷于胶板的两端，各搭住凝胶板约1cm左右， 引桥 的另一端浸于电泳槽内的巴比妥缓冲液中。接通电源，首先调节电流为3-4mA/凝胶板，电泳10－15分钟；然后调节电流为6-7mA/凝胶板，电泳30－40分钟，即可观察到分离的区带。5. 如果需要保留电泳图谱，可将电泳后的凝胶板（连同载玻片）放入清水中浸泡脱盐2小时，然后放烘箱（80℃左右）中烘干即可。 注意事项 1. 电泳样品应为新鲜的空腹血清。2. 加热溶化琼脂时，须防止水份蒸发过多。琼脂糖凝胶最好随用随制，以免凝胶表面干燥，影响分离效果。3. 制作凝胶板时琼脂糖浓度一般选用0.5%左右为宜，高于1%以上 －脂蛋白部分较紧密， 和前 －脂蛋白部分不够清晰；低于4.5%则凝固性较差，图谱不清。4. 点样口要大小适宜，边缘整齐、光滑，否则会影响电泳图谱。5. 在 －脂蛋白前若出现较浅区带，可列为前 －脂蛋白。6. 正常参考范围 －脂蛋白20~30% －脂蛋白 20~30%前 －脂蛋白 0~28%乳糜微粒（-） 本站注册用户不得侵犯包括他人及科研机构著作权在内的知识产权和其他合法权利，请勿在未经授权的情况下录入任何涉及侵权的实验方法。除非由您个人原创或经合法授权后转载。任何由用户发布的相关内容而引起的知识产权纠纷或其他法律纠纷，其责任均在用户本人，与本站无关。用户提交共享实验方法即表示用户本人已确认该方法不违反国家相关法律法规及本站协议，并且已拥有该方法的合法、完整的版权或者合法、完整的修改及转载授权。 涉嫌侵权实验方法举报方式 本站在提供给大家一个共享科研实验方法平台的同时，也完全尊重并保护原创者及机构的合法知识产权。但在工作运营中难免会有疏漏之处，所以大家一旦发现有涉嫌侵权的实验方法，我们官方支持并欢迎各位积极举报投诉，让本平台能在合法公正的基础上，切实为大家的科研工作带来便利。本站举报投诉格式如下： 涉嫌侵权实验方法举报： 1. 被举报实验方法链接：（请填写涉嫌侵权实验方法浏览页的URL链接地址） 2. 方法被举报投诉原因：（请填写被举报方法侵权的详细原因或相关有效证明） 以上信息您可通过以下联系方式提交给我们，网站编辑部会在接到举报后两个工作日内核实查证，并在一周内妥善处理。谢谢大家对本站的大力支持和信任！ 联系方式 电子邮箱： zhaorh@cobazaar.com 电话号码： 010-82439946 QQ 号 码： 1637588679 北京库巴扎信息科技有限公司