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动物组织块冻存在液氮,取出后放到1.5mlEP管中,EP管中加入RIPA裂解液(按照0.1mg组织最多1ml裂解液的体积使用,用前已加入PMSF),使用电动组织研磨器研磨,每次研磨时间10秒左右,研磨过程中发现蛋白质起泡,就像做蛋糕时鸡蛋被打出泡一样。请问如何避免这种情况?
PS,本来试着在冰上操作,但是电动组织研磨器工作时EP管震动的很厉害,没法放在冰上。
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回复:时间:2021-08-07
之前用过钢珠的研磨仪,时间很快的,一般1-2min吧,所以产热也不会很多啊,我们用之前还把固定EP管的器材提前放进-80℃冻了一下下,就几分钟,不敢冻太久,反正磨好了没什么温度,起泡的,没管,打磨过程必然会起泡吧,静置之后,选了一些没磨好的继续磨,然后就把打磨液吸出来就算好了。
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回复:时间:2021-08-13
展开引用claire樱奈动物组织块冻存在液氮,取出后放到1.5mlEP管中,EP管中加入RIPA裂解液(按照0.1mg组织最多1ml裂解液的体积使用,用前已加入PMSF),使用电动组织研磨器研磨,每次研磨时间10秒左右,研磨过程中发现蛋白质起泡,就像做蛋糕时鸡蛋被打出泡一样。请问如何避免这种情况?PS,本来试着在冰上操作,但是电动组织研磨器工作时EP管震动的很厉害,没法放在冰上。......前辈您好,我也刚准备组织提蛋白,用正常组织预实验出现类似您提到过的情况,最后您怎么处理呢?
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回复:时间:2021-08-13
朗朗健康前辈您好,我也刚准备组织提蛋白,用正常组织预实验出现类似您提到过的情况,最后您怎么处理呢?同问~你们提取组织蛋白的时候是直接加裂解液然后匀浆离心抽上清么?有没有超声之类的步骤啊?
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