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核酸的定量测定实验一紫外分光光度法
蚂蚁淘
/发布时间:1533849400 /浏览量:457
| 实验方法原理 | 核酸、核苷酸及衍生物都具有共轭双键系统,能吸收紫外光,RNA、DNA的紫外吸收高峰在260nm波长处。一般在260nm波长下,每1ml含1μgRNA的溶液光吸收值为0.022,每1ml含1μgDNA的溶液光吸收值约为0.020,故测定未知浓度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便、迅速。若样品内混有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质,则测定误差较大,故应该先除去。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 核酸 试剂、试剂盒 | 氨水钼酸铵-高氯酸试剂蒸馏水 仪器、耗材 | 分析天平离心机容量瓶紫外分光光度计吸管冰浴锅
实验步骤 | 1. 用分析天平准确称取待测的核酸样品500mg,加入少量蒸馏水调成糊状,再加入少量的水稀释。然后用5%～6%氨水调至pH7,定容到50ml。 2. 取两支离心管,向第一只管内加入2ml样品液和2ml蒸馏水,向第二只管内加入2ml样品液和2ml沉淀剂(以除去大分子核酸)作为对照。混匀,在冰浴中放置30min后离心(3000 r/min),从第一、第二管中分别吸取0.5ml上清液,用蒸馏水定容到50ml。用光程为1cm的石英比色杯于260nm波长处测其光吸收值(A1和A2)。 【结果处理】 DNA(RNA)%=[(A1-A2)/0.020(或0.022)](μg/ml)×100/样品浓度(μg/ml)样品浓度=500mg/(50×4/2×50/0.5) ml=50μg/ml。
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