2021-07-20【求助】怎样用液氮罐直接冻存细胞

细胞株的冻存：1． 取培养2～3天生长旺盛的细胞，用细胞培养液将细胞配成2×106～2×107/ml。2． 在1ml细胞冻存管中加入0.5ml细胞悬液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亚砜（或甘油），混匀后密封。置4℃ 1小时，－20℃ 2小时，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上过夜后浸入液氮中。这是我们实验室的做法，你斟酌一下！

将细胞冻存管置4 度冰箱中1.5-2小时, 然后直接放置-20 度的冰箱中2—3小时,然后将冻存细胞悬于用于存放工作细胞株的液氮罐口过夜，第2天将冻存管放入液氮中长久保存。

-20度拿出后，直接放入液氮罐也可以。我有时就是这么做的，再复苏时细胞状态也很好。当然，慢冻最好了，可以在液氮罐口下面悬一会，我认为无所谓多长时间与高度吧。隔个10来分钟向下放一点，两三次进入液氮就可以了吧。个人意见。-20度放置两个小时。我有时忘了，第二天才放液氮。-20度保存的话，应该能保存1年吧？请教。

-20度放一年也太长了。我－20度是放1～2小时，然后－80度放12小时，在液氮口放半小时，靠近液面再放半小时，最近投入液氮。效果也很不错！总之原则是要缓冻，具体条件自己摸索了！