2021-08-06【求助】无液氮罐，如何冻存细胞

４度30分钟，－20度1-2小时，－70度最长不超过3个月,每隔3个月复苏一次.建议最好在液氮罐保存,以确保细胞成活性.

太麻烦直接扔到负70倍儿好

不用液氮灌，可以用-70。我们是这样做的，将细胞转移至冻存管中，在-20放置半小时到一小时左右，预冻。之后放入-70中，我们尝试过载-70中放置1年的细胞没有问题，复苏之后状态尚佳。至于更长时间我们没有尝试过，但是老板说1年半没问题，在国外他试过。细胞冻遵循：慢冻速溶的原则。

装在有正丙醇的冻存盒中可以直接放在-80度

4度半个小时，直接放入－70，效果也8错。

lychenying装在有正丙醇的冻存盒中可以直接放在-80度请问正丙醇起什么作用？

拿毛巾包着冻存管就可以直接放进-70，即可以遵循细胞冻慢冻速溶的原则，又比较方便，不用先放-20，因为是慢慢冻进去的，所以能更好的达到梯度冻存

archsteed请问正丙醇起什么作用？應該是異丙醇才對.Nalgene有賣一種輔助細胞冷凍的產品"Mr.Frosty":http://www.nalgenelabware.com/products/productDetail.asp?product_id=405&subcategory_id=139&category_id=139&brand_name=NALGENE+Labware&category_name=Cryoware&subcategory_name=這個罐子裡面要加一些異丙醇,然後,把細胞收集處理好裝在冷凍保存管中,再把冷凍保存管插在這個罐子內的洞(可放18根),最後全部放在-80度冰箱,因為異丙醇的關係,罐內的溫度下降速度約為每分鐘1度,符合細胞冷凍過程需要慢速降溫的要求.所以放到隔天便可以將所有的冷凍保存管存放在液態氮中.這是個方便的東西,可買來試試.

你提供的网站上看不到价格，能告诉我价格以及代理商信息吗？

-70度可以放一年。估计时间够你用了。

能保证一年的估计也就无限了我觉得

我这里没准备-70度冰箱呢，一般在-30度冰箱能存多久呢？

我这里没准备-70度冰箱呢，一般在-30度冰箱能存多久呢？

-30数小时吧，0度到-60度都是细胞的危险温度，不能久放

冻存细胞4度10分钟,-20度半小时,-80度过夜后放液氮或直接放-80度保存,效果不错

1.选用对数生长期细胞，在收集细胞24小时前换液一次。2.用常规方法将细胞消化下来，按（1～5）×106/ml浓度、悬浮于含有10％DMSO的小牛血清或生长液中。冻存的细胞数量要充分，因复苏时接种的细胞数量应比平常多一些。3.用吸管吸取细胞悬液，分装于无菌安培管中(没管1ml)，严密封口，放入三层纱布小袋，注明细胞名称和冻存时间，便于以后查找。4.冻存当前已有专用细胞冻存器，能精确地控制冻存温度。在无冻存器的情况下，可用手工方法。从把安培悬液在液氮容器口开始，在30～40min内，下降到液氮表面，在停30min后，直接投入液氮中。或先将安培移入液氮罐口颈部气相中过夜，次日将纱布袋缓慢下降至液氮中，历时3分钟。在液氮中可长期保存。若没有液氮，可存于-80冰箱内，不过注意保存时间，比液氮短，可保存3个月左右

呵呵，大家都是从书上看的吧。实际上，我认为eric2231同志的慢冻速溶原则是正确的。慢冻是要给DMSO以渗透入细胞的时间，所以我的经验是4度的半小时要保证，之后就基本上可以马上冻起来也没有什么关系了。azhengyan01同志的毛巾包裹法十分新颖，呵呵。不过，从原理上看，确实是值得尝试的好方法，既保证了时间，又省去了搬来搬去的麻烦。至于-80度的保存时间，我亲眼所见，半年绝对没有问题。

你没有液氮罐，在４度的情况下，要看你是什么细胞了，如果是老鼠的细胞可以放１小时左右，其他细胞最多半小时（本人做过试验的）；在-２０度的情况下，老鼠的可以放１天左右，其他细胞半天，但其状态不是很好了；在-７０度的情况下，老鼠的细胞可以放１到２年，在此期间要复苏一次看其生长情况，其他细胞最多一年了，我也是自己摸索的，也请大家指导指导！