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克隆试剂盒选购指南
对PCR产物进行克隆是分子生物学领域以及基因工程领域里常用的方法。以前对PCR产物进行克隆实验,采用的方案有以下几种:一是将PCR产物切成两端平齐的双链DNA,然后克隆到切成平端的质粒载体上,或在PCR产物的两端加上人工接头(linker),经限制性内切酶处理后,克隆到质粒载体的相应位点上;二是在设计PCR引a端各带有一个T突出,而PCR扩增产物两个3’端各带有一个A突出的特点,在DNA连接酶的作用下,将PCR产物克隆到T载体中的过程,它是克隆PCR扩增产物的主要手段。pUC-TTA载体是一种高效克隆PCR产物的专用载体,它是由pUC18载体在EcoRV酶切位点处切开,在两侧的3’端添加T而成。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3’端添加一个A,它可以与pUC-T3’端的T互补连接,因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。你只需准备好PCE产物,一站式TA克隆试剂盒就能帮你完成TA克隆实验,自己无需再配制试剂。
加A试剂盒和加T试剂盒是利用TaqDNApolymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性,在只有dATP存在的情况下,在平末端的DNA片段加上一个dA尾巴或dT尾巴,使平末端片段也能被T载体克隆,用于克隆前的处理。
菌落PCR试剂盒则是用于鉴定T载体与目的片段连接后是否有阳性克隆(含插入片段)。
不同产品的包装规格有所不同,可根据实验需要进行选购。
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