靶向测序试剂盒
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Yeast Protein Isolation "YaffeSchatz"
蚂蚁淘
/发布时间:1630258203 /浏览量:452
YeastProteinIsolation"Yaffe-Schatz"
DavidAmberg
AdaptedfromYaffe,M.P.andSchatz,G.,PNAS,1984,81,4819-4823.
- Grow25mlsyeastcellsto5x10E6.
- Sequentiallyspindowncellsina15mlpolyprotube.
- Washcellswith1mlicecoldddH2O,transferrringtoaneppytube.
- Recon.cellsin1mlicecoldddH2Ocontaining100ug/mlPMSF.
- Add150ulicecold2NNaOH+8%2-ME(for1ml400ul5NNaOH+600ulddH2O+80ul2-ME).Mixbyinvertingtubeseveraltimes.Inc.onicefor10min.
- Add150ulicecold50%TCA,mixbyinvertingtubeseveraltimes.Inc.onicefor10min.
- Spin2min.inmicrofuge.Washpelletwith1ml.icecoldacetone,spin2min.andaspirateoffthesupernatant.Drypellet.
- ResUSPendpelletin100ulsamplebuffer:500ul3XSamplebufferpH6.8+500ulddH2O+12.5ul2-ME+25ul1MTRISbase+100ugPMSF+dabofbromphenolblue.Youmayhavetoworkatthis,I"veheardawirehomogenizerdoesthetrick.
- Heat95¡Cx2-5min.TryloADIng10ulonthegel,mayneedmore.
Note:MakePMSFat10mg/mlinisopropanolandstoreat-20¡C.
- 3XSampleBuffer:
- 0.2MTrispH6.8
- 6%SDS
- 30%Glycerol
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