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Yeast RNA Miniprep

蚂蚁淘  /发布时间:1630171808 /浏览量:224   

YeastRNAMiniprep

  • growcellstomid-logphase(10-20ml)(ortakesamplesfromtimecourses,5-25ml)
  • spincells,discardsupernatant
  • washcellsoncewith1mlcoldRNAbuffer
  • freezepelletindryice(andthan@-80°C)
  • thawcellsonice
  • add100-120µlicecoldRNA-buffer,resUSPendbyvortexing
  • add1/2vol.acidwashedglassbeads
  • vortexathighestlevel3minincoldroomoruseFastPrepmachine(20sec.,level4.5)
  • add450µlRNA-buffer-SDS(RT),vortexbriefly
  • add450µlequilibratedPhenol
  • vortexathighestlevel3minincoldroom
  • spinfullspeed10minincoldroom
  • transferupperphasetofreshtube(donottakeanyoftheinterface!)
  • add300µlequilibratedPhenol,vortex
  • add300µlChloroform,vortex
  • spin2min,extractupperphaseonceagainwithChloroform
  • add20µl4MNaCl,1mlEthanol
  • precipitate30minat-20to-80°C
  • spinfullspeed10min
  • washpelletwith150µl70%Ethanol
  • airdrypellet
  • resuspendin30-50µlH2O,storeat-20to-80°C

Buffers:(Allbuffercomponentsandstock-solutions,excepttheTris-stock-solution,areDEPCtreatedandautoclaved)RNA-buffer:50mMTris(HCl)pH7.4;100mMNaCl;10mMEDTA[for100ml:5ml1MTrispH7.4;2.5ml4MNaCl;2ml0.5MEDTA]RNA-buffer-SDS:RNA-buffer+1.3%SDS

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