- [08-01]eve如何移动扫描探针
- [07-31]化学与生物学新的前沿交叉领域——化学蛋白质组学
- [07-10]关于多肽核酸(PNA)
- [08-13]线粒体遗传病基因检测基因解码:查病因、阻遗传佳学基因官网:基...
- [11-04]信号通路中加入抑制剂和siRNA什么区别– 960问答
- [11-08]trna是否只有三个碱基_完美作业网_www.wanmeila.com
- [11-08]文献精读24ntsiRNA介导的DNA甲基化(RdDM)不定期更新
- [07-27]、tRNA的结构有何特点?有何功能? 懂得
- [11-08]siRNA和质粒转染有何区别
寡核苷酸探针原位杂交操作流程细胞爬片
一、材料准备:
1.细胞爬片:细胞爬片经固定液-4%多聚甲醛/0.1MPBS(PH7.0-7.6),含有1/1000DEPC,固定15min。经无水乙醇、95%、85%和75%乙醇各2min脱水。
2.探针:多聚寡核苷酸探针-FITC 2ug/ml
二、FISH操作流程
- 暴露mRNA核酸片段:细胞爬片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃消化5分钟。
- 原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
- 无水乙醇、95%、85%和75%乙醇各2min脱水。
- 预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20-30%甲酰胺150ml以保持湿度。按每张爬片滴加20μl预杂交液。恒温箱37℃ 2小时。吸取多余液体,不洗。
- 杂交:按每张切片20μι杂交液(内含寡核苷酸探针-FITC,2.0ug/ml),加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。如检测细胞爬片内的DNA需85-95℃变性6-8min;如检测细胞爬片内的RNA则无需变性。
- 恒温箱37℃杂交过夜(16h)。
- 杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次;37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次。或75℃,0.3XSSC洗5-8min。
- PBS洗2*3min。
- 用内含0.001%DAPI缓中甘油封片,-20℃保存备用。
================ 蚂蚁淘在线 ================
免责声明:本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容
版权声明:未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘在线”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。