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寡聚核苷酸定点诱变技术的基本原理
寡核苷酸,是一类只有20个以下碱基的短链核苷酸的总称(包括脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA内的核苷酸),寡核苷酸可以很容易地和它们的互补对连结,所以常用来作为探针确定DNA或RNA的结构,经常用于基因芯片、电泳、荧光原位杂交等过程中。
中文名
寡聚核苷酸
外文名
oligonucleotideDNA
类型
短链核苷酸的总称
作用
作为探针确定DNA或RNA的结构
应用
基因芯片、电泳、荧光原位
寡核苷酸合成的DNA(脱氧核糖核酸)可以用於链聚合反应,能扩增确定几乎所有DNA的片段,在这个过程中寡核苷酸是作为引物,和DNA中标的的互补片段结合,作成DNA的复制品。
调控寡核苷酸用於抑制RNA片段,防止其翻译成蛋白,在制止癌细胞活动方面能起一定的作用。
是由加拿大的生物化学家M·史密斯(MichaelSmith,1932—)发明的。其基本原理如下:
应用寡聚核苷酸进行DNA的定点诱变时,首先要把含有待突变的DNA片断段克隆到MI3噬菌体载体中,MI3噬菌体的正链可以感染具有纤毛的细菌,并在细菌体内进行复制后,以出芽的形式形成新的带有正链DNA的噬菌体。而存留在菌体内的则是双链状态的复制型MI3。受MI3噬菌体感染的细菌长生速度减慢,在细菌培养皿上会形成透明的噬菌斑。
将目的DNA插入到复制型MI3的多克隆位点上,去转染细菌,提取单链DNA作为突变的模板。根据需要设计并合成带有突变核苷酸序列的寡聚核苷酸引物,使与带有目的DNA的单链MI3模板杂交,然后加入DNA聚合酶和4种脱氧核糖核苷酸,使杂交上的突变引物延伸,并用DNA连接酶使新合成的DNA成环状,再去转染细菌。可用DNA序列分析的方法从所得到的噬菌体中筛选出带有突变DNA序列的突变体。在制备出含有突变体的复制型DNA后,可以用突变的DNA片段置换未突变的DNA相应的区段,从而得到完整的DNA突变体。
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