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2017-08-19做WB，actin内参出不来，但是曝光的时候marker能曝出来，就是条带出不来！！

Dynamite115
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之前一直都好好的，就是突然内参做不出来了，条件什么都没变。排查了一个多月了，也换了一抗和二抗。可还是做不出来。用丽春红染，有蛋白在膜上。就是敷完抗体之后曝不出来。但最近曝光的时候，可以发现内参条带很弱，基本上没有，但旁边的Marker却曝出来的很明显，这是什么原因呢？求大神解答。

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相关回复

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回复：时间：2017-08-21

同问。一样的条件在跑，突然间曝光变得很吃力，以为可能是一抗效价不行了，毕竟用了一个多月了，就换了新的一抗，结果依然是空白条带。楼主要是有什么发现，麻烦告知。

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回复：时间：2017-08-28

我最近也出现了这类问题，楼主有什么新发现吗，感谢告知

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回复：时间：2017-08-28

我也是，很头疼

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回复：时间：2017-08-20

会不会是发光液太久了呢

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回复：时间：2017-08-30

cecily0000001会不会是发光液太久了呢发光液都是现配现用的，还有其他可能的原因吗？

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回复：时间：2017-08-22

用的ECL发光液？

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回复：时间：2017-08-23

cecily0000001用的ECL发光液？是的啊，每次都是现用现配。而且也买了新的。

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回复：时间：2017-08-27

cecily0000001用的ECL发光液？shi de

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回复：时间：2017-08-20

铜钱草草shi deECL也现用现配？那定影液显影液呢

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回复：时间：2017-08-27

铜钱草草同问。一样的条件在跑，突然间曝光变得很吃力，以为可能是一抗效价不行了，毕竟用了一个多月了，就换了新的一抗，结果依然是空白条带。楼主要是有什么发现，麻烦告知。你的做出来了么

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回复：时间：2017-08-25

Dynamite115你的做出来了么要看今天的曝光结果

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回复：时间：2017-08-30

cecily0000001ECL也现用现配？那定影液显影液呢显影液和定影液是啥…peroxidesolution和enhancersolution？

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回复：时间：2017-08-19

就是最后让膜上的带显到X光片上，在小黑屋用到的那两个液体呀

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回复：时间：2017-08-25

铜钱草草要看今天的曝光结果我的今天做出来，把Marker剪掉开始孵育的一抗。做出来有条带，但是很淡。跟以前比还是不太正常。

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回复：时间：2017-08-26

cecily0000001就是最后让膜上的带显到X光片上，在小黑屋用到的那两个液体呀我们是转到PVDF膜上加发光液后机器曝光的

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回复：时间：2017-08-24

Dynamite115我的今天做出来，把Marker剪掉开始孵育的一抗。做出来有条带，但是很淡。跟以前比还是不太正常。我出来了部分。同一抗体同时孵育的两个条带曝光难易程度差很多。明天在看看内参。我有点怀疑我的一抗是不是不行了。

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回复：时间：2017-08-28

有可能

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回复：时间：2017-08-24

cecily0000001有可能不过，我抗体应该是五六月份买的，-20保存，冻融了两三次吧，这么容易坏？

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回复：时间：2017-08-24

这种不好说，抗体救你一个人用吗，如果有其他人用，出问题可能性也很大

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回复：时间：2017-08-23

cecily0000001这种不好说，抗体救你一个人用吗，如果有其他人用，出问题可能性也很大只有我一个人在用

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回复：时间：2017-08-25

那除了actin，此次试验的其他抗体的带夜视这个情况吗

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回复：时间：2017-08-27

cecily0000001那除了actin，此次试验的其他抗体的带夜视这个情况吗内参和其中一个目的最近都正常了。另外两个目的我觉得可能是一抗的问题，这俩抗体一开始连条带都没有，现在慢慢出来了，就是条带不明显，背景高。当初买来刚用的时候也是条带不明显背景高，然后慢慢清晰。难道要多用几次？

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回复：时间：2017-08-20

铜钱草草内参和其中一个目的最近都正常了。另外两个目的我觉得可能是一抗的问题，这俩抗体一开始连条带都没有，现在慢慢出来了，就是条带不明显，背景高。当初买来刚用的时候也是条带不明显背景高，然后慢慢清晰。难道要多用几次你的内参是怎么出来的，换了一抗么？

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回复：时间：2017-08-27

Dynamite115你的内参是怎么出来的，换了一抗么？一抗没换，只是以前和目的蛋白放一起了，最近分开来了，然后二抗浓度调高了。

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