- 蛋白酶颗粒_蛋白酶颗粒【价格,厂家,图片,批发,采购】_
- StressMarq活性Tau蛋白,稳定性极强!_新闻中心_...
- 怎么理解表面活性剂和分散剂
- 如果标准品购买回去不符合我们的要求,能退货吗?
- 第三代慢病毒载体,北京义翘神州新品呈现_公司新闻
- 常用的分子生物学技术包括哪些
- 人白介素8(IL8)ELISA试剂盒说明书_ELISA试剂盒...
- As An Unrest Life | category: ...
- 辛德毕斯病毒(Sindbis Virus)成熟过程的电镜研究
- 细胞STR鉴定
- 聚四亚甲基醚二醇 PTMEG1000 (韩国PTG)
- 【求助】pH计测量溶液读数都不稳定 经验共享 分析测试百...
- [08-19]腺病毒的一些常见问题及解答
- [08-12]请教如何构建双报告基因表达载体 核酸基因技术讨论版论坛
- [11-10]亚细胞定位。。。 分子生物 综合其他 论坛学术科研...
- [09-07]miR21慢病毒表达载体的构建及稳定转..._全文求助_互助区_医脉通_...
- [09-06]GUS报告基因的定性和定量检测 实验方法
- [08-17]转染抑癌基因KLF6对前列腺癌PC3细胞作用的实验研究手机知网
- [09-21]腺病毒载体优点
- [08-08]【求助】慢病毒相关问题 实验方法
- [08-05]组成型表达
相关回复
-
已帮助 0人
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2015-08-19
blowapc很成熟的手段了。找一篇学生毕业论文,照葫芦画瓢即可~最好能找到实验室,直接要质粒~~~谢谢!课题组之前用pTX4577构建过重组自杀质粒,制备感受态,转化是通过电转化,可成功制备目的基因突变株,但是效率太低,所以想问问,除了这个方法之外,还有没有更有效率的方法。
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2015-08-10
kajunin谢谢!课题组之前用pTX4577构建过重组自杀质粒,制备感受态,转化是通过电转化,可成功制备目的基因突变株,但是效率太低,所以想问问,除了这个方法之外,还有没有更有效率的方法。做突变这个技术,本身效率就不高……否则就像PCR一样泛滥了……只能根据自己菌的条件,摸索一些提高效率的方法,当然,一般来讲,不会有质的变化,顶多是更稳定而已。等你在这个菌上面做了十年八年,或许才能找到一些窍门。
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2015-08-10
blowapc做突变这个技术,本身效率就不高……否则就像PCR一样泛滥了……只能根据自己菌的条件,摸索一些提高效率的方法,当然,一般来讲,不会有质的变化,顶多是更稳定而已。等你在这个菌上面做了十年八年,或许才能找到一些窍门。恩,明白了,我还是踏踏实实地开始做吧,感谢有你!过程当中若是有疑问,还望不吝赐教!哈哈!
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2015-08-11
blowapc做突变这个技术,本身效率就不高……否则就像PCR一样泛滥了……只能根据自己菌的条件,摸索一些提高效率的方法,当然,一般来讲,不会有质的变化,顶多是更稳定而已。等你在这个菌上面做了十年八年,或许才能找到一些窍门。我将我的一些实验细节贴于此,你如果空的话,帮我看看其中哪些环节需要注意:用KpnI+SalI酶将pTEX4577切开,目的基因扩增后,用KpnI+SalI将目的基因片段连与上述切开的质粒,得到连接产物;将连接产物加入到由Top10F’菌制成的感受态中,得到重组细菌,进行自杀质粒的提取,后行酶切、PCR、Sequencing等鉴定,成功后用于后续实验;一系列准备工作后,将TX16感受态与上述成功的自杀质粒进行转化,电转化参数:用1.5kv电压持续5ms,电穿3次(既往文献报道),得到突变株。经PCR、PFGE、Southern鉴定后行生长曲线及稳定性鉴定;这是构建突变株实验思路,因为本人没有做过,为了避免少走弯路,请问需要注意哪些细节?
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2015-08-13
展开引用kajunin我将我的一些实验细节贴于此,你如果空的话,帮我看看其中哪些环节需要注意:用KpnI+SalI酶将pTEX4577切开,目的基因扩增后,用KpnI+SalI将目的基因片段连与上述切开的质粒,得到连接产物;将连接产物加入到由Top10F’菌制成的感受态中,得到重组细菌,进行自杀质粒的提取,后行酶切、PCR、Sequencing等鉴定,成功后用于后续实验;一系列准备工作后,将TX16感受态与上述成功的自杀质粒进行转化,电转化参数:用1.5kv电压持续5ms,电穿3次(既往文献报道),得到突变株。经PCR、PFGE、Southern鉴定后行生长曲线及稳定性鉴定;这是构建突变株实验思路,因为本人没有做过,为了避免少走弯路,请问需要注意哪些细节?......你做的是插入失活吧?不太了解你这个质粒啊!上面是否携带自杀基因呢?我只做过G-,对G+没有什么了解~TX16是你的肠球菌吧?我猜除了这一步电转化,其他步骤应该都不是问题。在G-里面,这一步很多情况下可以用结合来替代。
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2015-08-19
blowapc你做的是插入失活吧?不太了解你这个质粒啊!上面是否携带自杀基因呢?我只做过G-,对G+没有什么了解~TX16是你的肠球菌吧?我猜除了这一步电转化,其他步骤应该都不是问题。在G-里面,这一步很多情况下可以用结合来替代。恩,是插入失活,失活的标记基因是一个我们实验路线中要探讨的拟毒力基因;pTEX4577是带有卡那霉素抗性的大质粒,TX16是屎肠球菌(用于毒力及耐药常用菌),肠球菌尤其是屎肠球菌对多种抗菌药物天然耐药,所以pTEX4577是较常用的筛选质粒,大质粒pTEX4577经酶切后连接了我们拟失活的目的基因片段后,构建成了针对目的基因的自杀质粒;我也问过一些做此相关的人员,他们评估了此环节的耗时大概在半年左右,且成功者廖廖,屎肠球菌难度一在自杀质粒难以构建,二在转化效率奇低,课题组曾经有前辈做的脑壳都大了,所以向您及有经验的同仁咨询,集思广益,寻求更有效率的方式。
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2015-08-16
展开引用kajunin恩,是插入失活,失活的标记基因是一个我们实验路线中要探讨的拟毒力基因;pTEX4577是带有卡那霉素抗性的大质粒,TX16是屎肠球菌(用于毒力及耐药常用菌),肠球菌尤其是屎肠球菌对多种抗菌药物天然耐药,所以pTEX4577是较常用的筛选质粒,大质粒pTEX4577经酶切后连接了我们拟失活的目的基因片段后,构建成了针对目的基因的自杀质粒;我也问过一些做此相关的人员,他们评估了此环节的耗时大概在半年左右,且成功者廖廖,屎肠球菌难度一在自杀质粒难以构建,二在转化效率奇低,课题组曾经有前辈做的脑壳都大了,所以向您及有经验的同仁咨询,集思广益,寻求更有效率的方式。......质粒可以借鉴前人的基础,这个应该不难搞,只要抗性选好了,其他都不是什么难点。我认为,最难的就是遗传转化体系。我们在G-中已经放弃了电击转化这种方式,效率实在太低。质粒进入细菌以后,还需要发生一次同源重组,这些都是在电击转化及其恢复培养的过程中实现的。在G-中,我们一般通过结合转移方式来进行。
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2015-08-13
展开引用blowapc质粒可以借鉴前人的基础,这个应该不难搞,只要抗性选好了,其他都不是什么难点。我认为,最难的就是遗传转化体系。我们在G-中已经放弃了电击转化这种方式,效率实在太低。质粒进入细菌以后,还需要发生一次同源重组,这些都是在电击转化及其恢复培养的过程中实现的。在G-中,我们一般通过结合转移方式来进行。......恩,是的,我也涉猎了一些这方面的知识,本来是打算弄得很明白再开始,现在想想,还是在进程中不断摸索吧,想法再多,考虑再周全,也要在应用中不断去完善自己的知识体系及操作规范,所以,我要开始喽,哈哈,谢谢你!
- 1629309602腺病毒的一些常见问题及解答
- 1628704801请教如何构建双报告基因表达载体 核酸基因技术讨论版论坛
- 1510246366亚细胞定位。。。 分子生物 综合其他 论坛学术科研...
- 1630951209miR21慢病毒表达载体的构建及稳定转..._全文求助_互助区_医脉通_...
- 1630864803GUS报告基因的定性和定量检测 实验方法
- 1629136801转染抑癌基因KLF6对前列腺癌PC3细胞作用的实验研究手机知网
- 1632160804腺病毒载体优点
- 1628359203【求助】慢病毒相关问题 实验方法
- 1628100001组成型表达
- 1630692002一种酿酒酵母多基因表达载体及其构建方法与应用的制作方法
- 1439172780sprE基因敲除粪肠球菌突变株的构建和功能的初步研究
- 1627322405基因表达载体