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(1)原核表达的蛋白在空间构象上与在真核细胞是有区别的,缺乏一些特定的胞内折叠机制
(2)sds-page切胶回收的蛋白实际上是一个线形化的结构,缺乏正确的自然状态下的二三级结构,因此用它制备的血清所能结合的自然状态的病毒蛋白抗原决定簇有差异,最后表现在检测植物体内病毒时的非特异反应很强
(3)westernblot之所以能够检测是因为杂交到膜上的蛋白也是经过变性后成为线性化结构
不知道我这样说是不是有道理,我只是觉得如果三份这样的血清都出现这样的问题,应该不是检测方法操作的问题,而是血清本身有缺陷,虽然也有关于用这种方法制备血清并成功检测的报道.但是我想这与不同的病毒本身的性质有关.
望各位给予指点
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回复:时间:2005-10-24
我觉得楼主已经比较好的解决了自己的问题,文献报道成功的例子可能表位就在线性上,楼主的病毒可能是构像表位,建议选取非变性的表达蛋白纯化。原核表达和真核表达有一定区别,但在这里,应该作第二原因考虑。
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