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Fixation with Glutaraldehyde
蚂蚁淘
/发布时间:1545758958 /浏览量:216
1.137mMNaCl34.25ml2M 5mMKCl0.83ml3M 1.1mMNa2HPO45.5ml100mM 0.4mMKH2PO42ml100mM 2mMMgCl210ml100mM 2mMEGTA10ml100mM 5mMPIPES25ml100mM 5.5mMglucose495 pH6.1(Cytoskeletonbuffer),warm. 3.Cytoskeletonbufferwith0.3%(w/v)Triton-X100,0.5%glutaraldehyde,30ml.TritonX-100shouldbepipetedslowlywithap-200pipetmanandatrimmedtip.Wipetheoutsidesurfaceofthepipettipbeforeaddingtothebuffer.Pumpupanddownseveraltimestorinseouttheinsidesurface.Mixinafixativebottle,captightly,andwarminawaterbath. 4.Cytoskeletonbufferwith1%glutaraldehyde,30ml.Mixinafixativebottle,captightly,andwarminawaterbath. 5.Cytoskeletonbufferwith0.5mg/mlNaBH4,30ml.Preparefreshbeforeuseinafixationbox.BubblesshouldbevisIBLe.StoreNaBH4desiccatedinatightly-sealedcontainer. 6.Phosphatebufferedsaline,100ml,warm. 7.Fixationboxes/dished. 1.Rinsecoverslip2xwithwarmphosphatebufferedsaline. 2.Fix1mininbuffer3.Agitateperiodically. 3.Rinse2xwithcytoskeletonbuffer. 4.Fix15mininbuffer4.Agitateperiodically. 5.Rinse2xwithcytoskeletonbuffer. 6.Treat5mininNaBH4.Agitateperiodically. 7.Rinse2xwithcytoskeletonbuffer.FixationwithGlutaraldehyde
vol(for500ml)ofstockmg
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