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这里我想像大家介绍一种新的高效细胞活性和细胞增殖测定剂——alamarBlue。介绍之前先说最重要的一点,使用alamarBlue价格比较昂贵,如果你的银子不多,呵呵,还是乖乖告诉老板你的MTT结果吧。
细胞增殖检测主要有三种方法:第一、增殖期抗体的测定(例如Ki-67和CydlinE)。第二、增殖期DNA合成标记(3H,BrdU等)。相信这两种方法少有人做,反正以前我都没听过(见笑了)。还有第三就是增殖细胞对外界环境物质的降解测定(包括大家常做的MTT和XTT、MTS,还有今天要介绍的AlamarBlue)。
AlamarBlue是一种新型的细胞活性和细胞增殖的指示剂,是一种可溶、稳定、无毒的靛蓝染料,同时适用于贴壁和悬浮细胞。它对细胞抗原的表达和杂交瘤细胞的抗体分泌功能无影响,而且非常有意义的一点就是,经过AlamarBlue测定的细胞可以继续培养或进行其他的功能测定。AlamarBlue可以用普通分光光度计、荧光光度计和酶标仪进行测定,非常方便,其测定结果同样有线性趋势,而且线性范围更广,更灵敏和稳定。
主要应用于:
a.优化细胞培养条件
b.对细胞生长因子或细胞因子进行活性定量
c.有助于开发抗生素或抗肿瘤的新药
d.了解毒性物质或污染物对细胞生长的影响
e.评估细胞介导的细胞毒作用
f.定量检测凋亡发生
g.适用于真核细胞、真菌和细菌的活性和增殖测定。
附件是AlamarBlue的产品详细说明,实验操作手册。感兴趣的战友可以看一看。还有一篇文章是比较MTT和AlamarBlue的,不过很遗憾,我没能查到全文,如果哪位高手能查出来,真心希望能够贴出来与大家分享。
Hamid,R.,Rotshteyn,Y.,RabADI,L.etal.ComparisonofalamarblueandMTTassaysforhighthrough-putscreening.ToxicologyinVitro.200418(5);703-710.
alamarbluebooklet.pdf(153.16k)
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回复:时间:2004-08-16
顺便补充一下,该方法非常简单。买来现成的溶液,每孔(96孔板)加20ul液体,孵育一段时间即可;检测完了,再弃去染色上清,更换新的培养上清,细胞又可以接着养了。我想,这两点大家一定喜欢:)
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回复:时间:2004-08-20
我们是向国内的试剂代理买的:25ml1425元100ml3525元供大家参考。具体联系方式不想在这里写出,我可不愿给他们做免费广告。若要详细联系方式,可以PM给我。
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回复:时间:2004-08-25
coffejumps顺便补充一下,该方法非常简单。买来现成的溶液,每孔(96孔板)加20ul液体,孵育一段时间即可;检测完了,再弃去染色上清,更换新的培养上清,细胞又可以接着养了。我想,这两点大家一定喜欢:)我用了,效果还不错我想问的是,您是怎么检测的?打开96孔培养板测完后,不怕污染吗?还能在养吗?我也是看中可继续培养这一点,可是我们的荧光酶标仪要求打开培养板的盖子。我担心污染,所以都没再接着养.
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回复:时间:2004-08-23
zzzyyy1977我用了,效果还不错我想问的是,您是怎么检测的?打开96孔培养板测完后,不怕污染吗?还能在养吗?我也是看中可继续培养这一点,可是我们的荧光酶标仪要求打开培养板的盖子。我担心污染,所以都没再接着养.现在进口的细胞培养板,板盖透明、均匀并且折光率也较好,个人认为可以直接加盖进行读数,如果大家都是在一种状态下进行读数,之间的误差是可以相互抵消的。若是一定要打开盖子,我也没有好的办法。强调一点,细胞培养板从37度孵箱中取出后应立刻读数,否则会由于温度差异在板盖上形成一层水雾,这样就无法在有盖子的情况下读数了。
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回复:时间:2004-08-25
zzzyyy1977我用了,效果还不错我想问的是,您是怎么检测的?打开96孔培养板测完后,不怕污染吗?还能在养吗?我也是看中可继续培养这一点,可是我们的荧光酶标仪要求打开培养板的盖子。我担心污染,所以都没再接着养.我想问一下,为什么不是直接把上清液吸到空白96孔板里去测,有细胞的继续换上新的培养液养?是不是离开了细胞以后,被还原的成分又会被氧化回去啊?
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