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样品是血液,想要从血清中提纯一种蛋白,实验设计是过两个柱子,DEAE-FF预装柱+S-SepharoseFF预装柱,两个柱子都是20ml,上样量5ml的柱子……做实验过程发现样品的浓缩是一个大麻烦事情,还有一个就是过第二个柱子之前对样品的处理(置换缓冲溶液+浓缩),实验室有GE的HitrapDesalting脱盐柱,5ml的,想请教一下各位前辈,怎么使用脱盐柱进行缓冲液的置换?具体怎么步骤??谢谢…………
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回复:时间:2016-10-24
缓冲液为要置换到的缓冲液。步骤:1,用缓冲液平衡2,上样3,继续用缓冲液洗脱1.5CV以上。一般蛋白在1/3柱体积出峰。注意:1,上样量不超过20%柱体积,也就是5ml柱子上样量一般小于1ml,不过试验很快,一次试验10min搞定。2,脱盐柱无法起到浓缩效果,会一定程度稀释样品。
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