1.用50mlTNM-FH/10％FBS培养液在500ml旋转培养瓶中培养Sf9细胞，直到细胞密度达到约1×10⁵细胞/ml（见昆虫细胞保存培养实验）。

2.室温下以1000g离心10min回收细胞，弃去上清。加入10～20ml新鲜的TNM-FH/10％FBS培养液重悬细胞团块。加入感染复数（MOI）为0.1～0.5的病毒接种（见步骤1.2）。

MOI以pfu/细胞来表示。感染给定数目细胞的病毒接种物的体积=MOI（pfu/细胞）×[细胞数/毒种储液的滴度（pfu/ml）]

3.将细胞重新放入旋转培养瓶中，用TNM-FH/10％FBS培养液将体积加至100ml。27℃置搅拌台上以60～80r/min恒速搅动，培养3～4天。周期性地取少量悬浮培养细胞在显微镜下观察细胞病变效应及包含体。

4.当大多数细胞含有包含体或显示出细胞病变效应时（通常是感染4～5天后），将细胞培养液移入灭菌试管中，4℃以1000g离心10min，将上清移至一新的灭菌试管。分别吸取1ml上清移至几个螺口冻存管中，置液氮罐长期保存。将剩余的病毒置暗处4℃短期保存。