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我转的是7901、7901/DDP两种细胞,前者7901细胞很容易就转上,并且转后,状态良好,可是7901/DDP一转就死,我用的是吉玛慢病毒,转24小时后换液,刚开始一两天,没有异常,但后来细胞慢慢就死了,并且不是漂浮的,很多是贴着壁死,像是瓦解了一样
这是未转时细胞的样子
这是细胞转后,死亡的样子
并且即使是有些细胞未死,细胞后来也变得很脏,感觉有很破碎的细胞碎片
本人实验小白,**园子里大神指点,急,实在不知道怎么回事
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回复:时间:2017-05-04
展开引用duocaihui 我转的是7901、7901/DDP两种细胞,前者7901细胞很容易就转上,并且转后,状态良好,可是7901/DDP一转就死,我用的是吉玛慢病毒,转24小时后换液,刚开始一两天,没有异常,但后来细胞慢慢就死了,并且不是漂浮的,很多是贴着壁死,像是瓦解了一样这是未转时细胞的样子这是细胞转后,死亡的样子并且即使是有些细胞未死,细胞后来也变得很脏,感觉有很破碎的细胞碎片本人实验小白,**园子里大神指点,急,实在不知道怎么回事......细胞感染按照MOI吗?对照组呢?
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回复:时间:2017-05-11
展开引用duocaihui我转的是7901、7901/DDP两种细胞,前者7901细胞很容易就转上,并且转后,状态良好,可是7901/DDP一转就死,我用的是吉玛慢病毒,转24小时后换液,刚开始一两天,没有异常,但后来细胞慢慢就死了,并且不是漂浮的,很多是贴着壁死,像是瓦解了一样这是未转时细胞的样子这是细胞转后,死亡的样子并且即使是有些细胞未死,细胞后来也变得很脏,感觉有很破碎的细胞碎片本人实验小白,**园子里大神指点,急,实在不知道怎么回事......转染前细胞状态如何?第几次转染了?
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回复:时间:2017-05-13
练医学生转染前细胞状态如何?第几次转染了?我也遇到了同样的问题,转染前细胞状态很好,转染24小时后换回完全培养基,细胞状态也很好,但是换液后第二天就开始大量由中心向四周围贴壁死,只有孔板周围还有零散的几个细胞还活着,求解呀
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回复:时间:2017-05-11
楼主呀,我也遇到相同的问题,转染前细胞状态很好,转染24小时后换回完全培养基,细胞状态也很好,但是换液后第二天就开始大量由中心向四周围贴壁死,只有孔板周围还有零散的几个细胞还活着,求解呀
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回复:时间:2017-05-11
狼牙gg细胞感染按照MOI吗?对照组呢?我在做慢病毒转染,把目的miRNA分别上调和下调,请问这两个(hU6-MCS-ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin和Ubi-MCS-SV40-EGFP=IRSE-puromycin)阴性对照病毒是一样的吗?也就是过表达阴性对照和抑制表达阴性对照是不是都是一样的,那么我在做转染的时候是不是只做一组慢病毒阴性对照就行了,还是说过表达阴性对照和抑制表达阴性对照都要做?就是说我的分组是1·空白组:细胞2·过表达组:转染过表达慢病毒3·过表达对照组:转染Ubi-MCS-SV40-EGFP=IRSE-puromycin4·抑制表达组:转染抑制表达慢病毒5·抑制表达对照组:转染hU6-MCS-ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin还是说过表达对照和抑制表达对照这两组做其中的一组就可以了?急需解答,谢谢!
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回复:时间:2017-05-07
楼主请问你的问题解决了吗?我也是做的SGC7901转染,用的lipo2000的脂质体。我的分组为未处理组,SIRNA下调组,和只加了lipo2000的组。我发现转染后第二题只加lipo2000的组的细胞大片死亡,反而下调组长得很好,请问你有没有遇到过这种问题呢?你转染前种六孔板每孔种的多少细胞,转染时每孔加多少lipo2000呢?这个问题困扰我很久了,导致下面的实验一直做不下去,希望做过的人可以不吝赐教,不甚感激!
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回复:时间:2017-05-06
我也是做HAC15细胞转染,用的lipo3000的脂质体。我发现制备DNA脂质体复合物,室温孵育时间大于15分钟后,再加入六孔板,细胞不容易死。如果室温孵育时间5-10分钟加入六孔板,第二天细胞容易死,两者的转染都很差,这个问题困扰我很久了,导致下面的实验一直做不下去,希望做过的人可以不吝赐教,不甚感激!
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