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病毒中和实验一固定抗血清-稀释病毒法
| 实验方法原理 | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 已知标准的抗病毒血清(20抗体单位0.1ml) 试剂、试剂盒 | 已知阴性血清(56℃30min灭活)宿主:敏感细胞、敏感动物、鸡胚 仪器、耗材 | 细胞培养板水浴锅细胞培养箱
实验步骤 | (以细胞培养为例):①用细胞维持液连续10倍稀释病毒分离物10-1~10-8); ②取0.6ml不同浓度的病毒稀释液与0.6ml标准的抗病毒血清混合; ③再取0.6ml不同浓度的病毒稀释液与0.6ml已知的阴性血清混合; ④将混合液置37℃水浴1h,然后取0.2ml混合液分别接种于细胞已长成单层的96孔细胞培养板中,每一稀释度接种5孔,设5孔正常细胞对照; ⑤将细胞培养板置37℃、5%CO2温箱中孵育,每日观察细胞病变效应(CPE)。 ⑥中和试验的病毒CCID50的计算:细胞培养中,通常是以病毒的组织半数感染量(CCID50/单位体积)作为中和反应的终点。而动物试验中,用动物半数致死量(LD50/单位体积)作为中和反应的终点。中和试验中,抗血清组的CCID50与阴性血清组的CCID50之差的对数等于或大于2,才能说明中和试验结果为阳性。 注意事项 | 展开 其他 | 用中和试验方法鉴定病毒时,将不同稀释倍数的病毒与标准的抗血清(20个抗体单位/单位体积)混合、孵育,使二者充分反应,然后将混合液接种到敏感宿主体内,观察试验结果。
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