ChromosomalDNAIsolationMETHOD:

1. Growcellsin2-5mlbrothtolatelogphase.
2. Pellet1-2mlcellsinmicrofuge.
3. ResUSPendcellsin400µlTES(50mMTris-HCl,10mMNaCl,10mMEDTA,pH7.5).
4. Add:17µl30%(w/v)sarkosyl(finalconcentrationof1%)and5µl10mg/mlproteinaseK(finalconcentration100µg/ml).
5. Incubateat37ºCfor30-60minutes,oruntilthesolutionclears.
6. Add400µl4MNH4OAcandmixwell.
7. Extract2Xwith1:1phenol:chloroform.
8. Extract1Xwithchloroform.
9. PrecipitatewithanequalvolumeofisopropanolatRTfor10minutes.
10. Resuspendpelletin400µl0.1MNaOAcpH6.0.Pelletmaynotresuspendcompletely.ReprecipitateDNAwith800µlEtOHfor15minutesatRT.
11. Centrifugeat11Kfor15minutestopelletDNA.
12. Rinsepelletin1ml70%EtOHfor5minutes.
13. Drypelletbyplacingopentubein37Cincubatororonbenchtopfor15-20minutes.
14. ResuspendDNAin50ulTE(10mMTrispH8.0,0.1mMEDTA)overnightat4C.Mayadd1µlRNasetohelpDNAdissolve.Yields25-50ugofDNA;use1-5µlperdigest.

================  蚂蚁淘在线  ================

免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容

版权声明：未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘在线”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。