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原代细胞免疫荧光鉴定步骤【赛百慷】
为了更好的帮助客户提供真实的原代细胞,使用免疫荧光鉴定出提取的细胞类型,免疫荧光技术又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。一下是赛百慷技术人员提供的免疫荧光细胞鉴定的步骤,仅做参考:

取4片玻璃片于24孔板中,每孔加入培养基1mL,加入细胞0.02million个/孔。置培养箱2h或过夜。
2.固定
细胞爬片后,吸出培养基,用PBS洗一遍,加入4%PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS,放4℃过夜。
3.破膜封闭
将玻片除去水分,置于培养皿支撑物上,
玻璃片封闭液配置:0.5%TritionX-100与PBS1:1混合,再加10%血清,
取50uL破膜封闭液滴于防水膜上,将玻片上有细胞的一面盖上2h。
4.一抗孵育
一抗配置:抗体与PBS1:100(200)稀释
破膜后,取50uL一抗于防水膜上(湿盒中),将玻片有细胞的一面盖上置于4℃(最多可放置一周)
阴性对照组可用PBS代替一抗。
5.二抗孵育
PBS洗3×5min/次,
二抗混合液配置:二抗:PBS=1:500
DAPI:PBS=1:1000
防水膜上滴50uL二抗混合液,盖上玻片,避光,室温放置2h。
6.包埋
PBS洗3×5min/次,玻片上各滴1滴Fluoromount-G,将有细胞的一面盖上。
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