2021-07-25【求助】肝癌细胞株HepG2污染问题

细胞看着好瘦弱，形态有点不对

我也出现过这种问题，黑色圆形点点，运动活跃，低倍镜下细沙样，培养基不变浑浊，不知道是不是黑胶虫，确定不是细菌污染，因为也曾经遭受过细菌污染，（细胞培养经历可谓是沧桑）。师兄说是血清不好，可是四季青的血清很多人也用的啊，同求前辈指教！

这种污染本人遇到过，情况很复杂，各种可能都有，因为你描述说“像雾蒙蒙的很模糊的一层流沙样”所以应该不是嘿胶虫，这种污染我后来找到的原因是所在房间空气不干净造成，排除原因的时候用96孔板种空白培养基的方式，把你认为可能的因素作单一变数，培养箱里培养1-4天看污染情况。

黑巧克力momo细胞看着好瘦弱，形态有点不对是呢，细胞突然间就这样了啊，急死人了

86元我也出现过这种问题，黑色圆形点点，运动活跃，低倍镜下细沙样，培养基不变浑浊，不知道是不是黑胶虫，确定不是细菌污染，因为也曾经遭受过细菌污染，（细胞培养经历可谓是沧桑）。师兄说是血清不好，可是四季青的血清很多人也用的啊，同求前辈指教！我的在低倍镜下观察并没有看到运动啊，你的问题解决了吗？急！！！

biodiagnosis这种污染本人遇到过，情况很复杂，各种可能都有，因为你描述说“像雾蒙蒙的很模糊的一层流沙样”所以应该不是嘿胶虫，这种污染我后来找到的原因是所在房间空气不干净造成，排除原因的时候用96孔板种空白培养基的方式，把你认为可能的因素作单一变数，培养箱里培养1-4天看污染情况。今天有一瓶细胞长满了，我没有传代，消化后丢弃了一部分细胞，另外两瓶小的还是那个样子，每次换液的时候我都用PBS洗2-3遍，可是根本洗不掉，请问你现在的细胞状态怎么样？小黑点还有吗？你房间的空气是怎么处理的啊？那我是不是换个细胞房呢

86元我也出现过这种问题，黑色圆形点点，运动活跃，低倍镜下细沙样，培养基不变浑浊，不知道是不是黑胶虫，确定不是细菌污染，因为也曾经遭受过细菌污染，（细胞培养经历可谓是沧桑）。师兄说是血清不好，可是四季青的血清很多人也用的啊，同求前辈指教！我也是用的杭州四季青的血清，实验室都用他家的啊，你问题解决了吗？在实验的最后关头出现这种问题，急死人了！

请问前辈遇到过这种情况啊，指点一下吧，真的很着急，

这种细胞状态用来做实验应该会影响实验结果的吧？

感觉不是污染，像是细胞状态问题，试试用PBS轻轻洗两遍，不要用胰酶吹，然后换20%血清培养看看。细胞贴得不牢，和小碎片的增多是有关系的。

支原体用常规显微镜看不到，细菌也只有这类细胞直径大小的几十分之一

宝宝5211314我的在低倍镜下观察并没有看到运动啊，你的问题解决了吗？急！！！要在高倍镜下看，低倍镜有时是看不出来的。通过频繁换液，只是有改善，还没完全清除，细胞状态好的时候就少。

86元要在高倍镜下看，低倍镜有时是看不出来的。通过频繁换液，只是有改善，还没完全清除，细胞状态好的时候就少。那你一直用它来做实验的吗？对实验结果会不会有影响啊？

就是等细胞好转再做实验，所以也是很急很烦躁啊，再不行就去借细胞重新养了。

86元就是等细胞好转再做实验，所以也是很急很烦躁啊，再不行就去借细胞重新养了。哦，我也是很急啊，哎，请问你是哪里的啊？

86元要在高倍镜下看，低倍镜有时是看不出来的。通过频繁换液，只是有改善，还没完全清除，细胞状态好的时候就少。我在400倍下看，小黑点的确不动，我现在高度怀疑是细胞状态不好，导致的细胞碎裂之后释放的分泌物，因为细胞内部也有很多，但是换液时发现漂浮死细胞很少很少，培养基清亮的，新一批血清来了，等我换换新血清复苏新的细胞看看吧

小黑点可能是支原体感染造成的细胞碎片，建议做个pcr检测一下支原体，http://wenku.baidu.com/view/d8f6f6a3a0116c175f0e485f.html。

defead小黑点可能是支原体感染造成的细胞碎片，建议做个pcr检测一下支原体，http://wenku.baidu.com/view/d8f6f6a3a0116c175f0e485f.html。如果是支原体污染的话为什么同一个培养箱里的另一种细胞养的好好的呢？我应该还是细胞或者血清的问题

支原体污染可能来自你的操作和血清，或者细胞本来就有，只是不容易发现，这个到现在好像还没有证据表明能通过空气传播。

你既然找不到原因为何不试一下，就设计两队引物扩个PCR的时间

defead支原体污染可能来自你的操作和血清，或者细胞本来就有，只是不容易发现，这个到现在好像还没有证据表明能通过空气传播。嗯，谢谢，如果真的是支原体污染，该做什么处理？

这细胞看着不像HepG2细胞呀，HepG2细胞基本都是成团生长；同时期待楼主的小黑点检测结果

就是污染了，重新复苏一支，直接加双抗培养吧当开始复苏出来没问题，过几天就污染了，怀疑你的冻存细胞就是污染的

生命流浪者这细胞看着不像HepG2细胞呀，HepG2细胞基本都是成团生长；同时期待楼主的小黑点检测结果我们实验室以前冻存的，之前还有几个师姐用过的，是她们冻存的……

elite_xy就是污染了，重新复苏一支，直接加双抗培养吧当开始复苏出来没问题，过几天就污染了，怀疑你的冻存细胞就是污染的我也这样怀疑……

可以用MycoplasmaOUT?Treatment

宝宝5211314我们实验室以前冻存的，之前还有几个师姐用过的，是她们冻存的……ATCC的图建议看一下这个帖子（鉴定国内HepG2的真实身份-蚂蚁淘论坛）的讨论

展开引用生命流浪者ATCC的图建议看一下这个帖子（鉴定国内HepG2的真实身份-蚂蚁淘论坛）的讨论......嗯，我看了一下，的确不一样，我的和2,3,4图的差不多……中国的科研就这么回事吧！

自己顶一下，大家可以发表一下意见啊，有见过的没啊，急急急急！！！

见过啊，你试试不就知道了吗，与其问别人自己动个手就ok了，如果是支原体污染，直接用MycoplasmaOUT?Treatment一天搞定

楼主的情况我也遇到过我的解决方法如下：1、重新取新的细胞种复苏，更换胰酶、培养基、血清，使用一次性培养皿。2、条件允许的话，尽量有自己独立的培养细胞环境，不要被别人给污染了，以前我们实验室就是很多人做实验，你就是再细心，还是会被别人给污染了，所以，如果如果可以，尽量少一点其他人的污染因素3、实在不行，就等别人放假了再做实验，嘿嘿，我就是这么干的，别人放假了，实验室很安静，人也很少，不会被污染，细胞涨的也很快。4、楼主还是注意一些细节问题，例如正确的操作方法很对头，特别是枪的应用，很关键，回吸太快，剪切力很大，会有液体残留在枪里，会造成污染，等等

展开引用丁香瓜楼主的情况我也遇到过我的解决方法如下：1、重新取新的细胞种复苏，更换胰酶、培养基、血清，使用一次性培养皿。2、条件允许的话，尽量有自己独立的培养细胞环境，不要被别人给污染了，以前我们实验室就是很多人做实验，你就是再细心，还是会被别人给污染了，所以，如果如果可以，尽量少一点其他人的污染因素3、实在不行，就等别人放假了再做实验，嘿嘿，我就是这么干的，别人放假了，实验室很安静，人也很少，不会被污染，细胞涨的也很快。4、楼主还是注意一些细节问题，例如正确的操作方法很对头，特别是枪的应用，很关键，回吸太快，剪切力很大，会有液体残留在枪里，会造成污染，等等......嗯，谢谢你呀

宝宝5211314我在400倍下看，小黑点的确不动，我现在高度怀疑是细胞状态不好，导致的细胞碎裂之后释放的分泌物，因为细胞内部也有很多，但是换液时发现漂浮死细胞很少很少，培养基清亮的，新一批血清来了，等我换换新血清复苏新的细胞看看吧好久没来蚂蚁淘了。我去借了细胞，长得很好，背景很干净，400倍似乎还是能见到少许会动的点点，师姐们说正常，也可能是做布朗运动的颗粒，只要细胞状态好，做实验还是没问题的。你换血清后问题解决了没？

86元好久没来蚂蚁淘了。我去借了细胞，长得很好，背景很干净，400倍似乎还是能见到少许会动的点点，师姐们说正常，也可能是做布朗运动的颗粒，只要细胞状态好，做实验还是没问题的。你换血清后问题解决了没？换血清后没有解决问题，我也重新借了细胞，现在细胞状态很好，估计可能就是细胞老化的问题了，细胞时间太长了，祝实验顺利~