2021-07-23刚买的细胞株的处理

“是不是最好大量培养，然后冻存，分次取用于实验？”——是，应为如果是有限系细胞系，传代次数有限制的，即使是无限系的，传代多了也可能产生变异(transform)建议第一次用25cm2的培养瓶，然后逐步扩增。

“建议第一次用25cm2的培养瓶”，“一管”细胞株不知是用多少个25cm2的培养瓶培养存放？就一个瓶就够了吗？

主要是，我需要把握个大概的量，才好去买ECGS、血清等等。尤其是ECGS，那么贵，买多一点也是花很多钱了！再想问一下，培养来冻存的细胞，培养基中也要加ECGS吗？

看来你用的细胞是有限细胞系中的内皮细胞了，买来的一管细胞后，常规复苏后，用5－7毫升培养液培养在25cm2的培养瓶中，2天后换液，一般3－4天能传代。传代时应该按照保守的方法传代，一般以1:2或者1；2.5传代，最多不超过1:3，具体情况视细胞生长情况而定，有时若细胞长势差，还得考虑采用1:1的传代。培养液的配方一般不变，一直都加ECGS(为什么不考虑用罗氏的ECGF，比ECGS便宜且好用)，如果细胞实在长得太好，可以略降低一些生长因子浓度。另外，当你的细胞传了2－3代左右时，细胞比较多了，你可以考虑多冻存一些。冻存细胞的配方是这样的：90%的胎牛血清(用进口的，实在不行就用进口的新生牛血清)，10%的DMSO。以后复苏细胞就可以先用培养瓶在温箱中温孵5毫升培养液，细胞解冻后，直接加入培养瓶中，24小时后换液，即可，免除了离心对细胞的损伤。