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小鼠瘦素(Leptin)ELISA试剂盒 说明书
上海西唐生物科技有限公司021-55229872,65333639www.westang.com 原理 本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗小鼠Leptin单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的Leptin与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠Leptin,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,Leptin浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中Leptin浓度。 试剂盒组成(2-8℃保存) 酶标板(CoatedWells) 96孔 酶标抗体工作液(EnzymeConjugate) 12ml 10×标本稀释液(SampleBuffer) 12ml 20×浓缩洗涤液(WashBuffer) 50ml 标准品(Standards):10ng/瓶 2瓶 底物工作液(TMBSolution) 12ml 第一抗体工作液(BiotinylatedAntibody) 12ml 终止液(StopSolution) 12ml 准备试剂与收集血样 1.收集标本:血清、血浆(EDTA)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融。血清、血浆、细胞培养上清可能需要稀释,请先做预实验,以确定稀释倍数。 2.标准品液配制:使用前加入0.5ml蒸馏水混匀,配成20ng/ml的溶液。设标准管8管,第一管加标本稀释液900ul,第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。 3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。 4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水) 检测程序 1.加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。 2.洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。 3.每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。 4.洗板:同前。 5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。 6.洗板:同前。 7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应15分钟。 8.每孔加入100ul终止液混匀。 9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。 结果计算与判断 1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。 2.以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。 3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应Leptin含量,再乘上稀释倍数。 试剂盒性能 1.灵敏度:最小的Leptin检测浓度小于14pg/ml。 2.特异性:可同时检测重组或天然的小鼠Leptin。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。 3.重复性:板内、板见变异系数均小于9.7%。 注意事项 1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。 2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。 3.板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。 4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。 5.本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!
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