摘要： 目的:近年来,美国科学家发现高尔基体蛋白73(GP73)有可能成为更好的诊断肝癌的血清标志物.但是目前国内外都使用多克隆抗体检测GP73,由于多克隆抗体制作的重复性差,且不能大规模生产,所以临床应用受到了限制.本实验探讨采用单克隆抗体检测GP73蛋白在肝细胞肝癌(HCC)诊断中的敏感性和特异性.方法为了临床大规模检测肝癌病人血清GP73表达水平,我们首先要制备GP73单克隆抗体.本实验首先将GP73抗原(4μg/ml)免疫6～8周龄BALB/c雌性小鼠,基础免疫和加强免疫之后,取血测定抗体滴度.取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞在50%PEG作用下融合.经反复筛选杂交瘤细胞和杂交瘤细胞的克隆化,接着向BALB/c小鼠腹腔接种杂交瘤细胞,1周后取腹水,离心取上清液,用蛋白A亲和层析方法进行纯化.紫外分光光度计测量抗体蛋白溶液OD280nm值,利用公式C(mg/ml蛋白)=OD280ml/1.43计算抗体浓度.为了探讨单克隆抗体检测GP73蛋白在肝癌诊断中的敏感性和特异性,本实验采用Western Blotting法测定人血清中GP73蛋白相对含量.待测血清经过电泳后,使用iBlot快速转膜仪进行转膜.牛奶或BSA封闭后,置于杂交膜内,加一抗4℃摇床孵育.TBST洗脱后,接着加二抗室温孵育,TBST洗脱后,使用ECL暗室曝光.X光片扫描后,分析各条带的灰度值.结果使用单克隆抗体检测正常人群的GP73水平(1.3±0.1)RU(relative unit),肝癌组血清GP73水平与对照组相比显著增高(5.8±0.8)RU vs.(1.3±0.1)RU,P 0.001;肝癌组血清GP73水平(多克隆抗体)与对照组相比显著增高(7.8±0.7)RU vs.(1.1±0.03)RU,P 0.001;GP73单抗诊断HCC的敏感性和特异性分别为84.7%和93.5%,GP73多抗诊断HCC的敏感性和特异性分别为78.0%和93.5%,而采用AFP诊断HCC的敏感性和特异性分别为67.8%和74.2%.Logistic回归分析,GP73单抗的优势比(OR)为7.18,而GP73多抗的OR为1.51.结论单克隆抗体可以检测肝癌患者血清GP73蛋白水平,比AFP具有更高的敏感性和特异性,也可能优于目前使用的GP73多克隆抗体的检测. 展开 我们已与文献出版商建立了直接购买合作。 你可以通过身份认证进行实名认证，认证成功后本次下载的费用将由您所在的图书馆支付 您可以直接购买此文献，1~5分钟即可下载全文，部分资源由于网络原因可能需要更长时间，请您耐心等待哦~