1.按适当百分比浓度制备聚丙烯酰胺分离胶，加入10mg/ml激酶底物，使其在分离胶混合液中的终浓度达到1mg/ml。均匀混合后浇入制胶装置使其聚合。

2.按通常的方法制备有激酶活性样品的SDS-PAGE电泳样品，电泳。

3.电泳完毕后将胶放入200ml20%（V/V）2-丙醇/50mmol/LTris•Cl，pH8.0的洗液中，漂洗20min，换入新的缓冲液，再重复2次。

4.用200ml的1mmol/LDTT/50mmol/LTris•ClpH8.0洗3次，每次20min。

5.用250ml的6mol/L盐酸胍/1mmol/LDTT/50mmol/LTris•ClpH8.0或8mol/L脲/1mmol/LDTT/50mmol/LTris•ClpH8.0洗2次，每次30min。

6.在18h以上的周期内用250ml的1mmol/LDTT/0.05%（V/V）Tween20/50mmol/LTris•Cl（pH8.0）的溶液，4℃，洗8～10次，使蛋白质充分复性。

7.将胶放入250ml与激酶匹配的反应缓冲液中（含10mmol/LMgCl₂），30℃，温浴20min。

8.移走所有残存缓冲液，将胶放入带有密封盖的容器或可热密封的聚乙烯袋（容器应为放射性物质专用）。加入尽量少的激酶反应缓冲液，以正好覆盖胶面为准。加1/4反应缓冲液容积的10mmol/LMg/ATP溶液（终浓度50μmol/LATP），最后加入20μCi/ml[γ-³²P]ATP。

9.30℃，温浴1h。

10.在250ml的5%TCA中将胶浸泡15min，重复一次。在500ml1%焦磷酸钠/5%TCA中洗胶，重复洗涤，直至洗液几乎不含放射性物质。

11.在滤纸上使胶干燥，放射自显影。