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【核糖核酸酶A】用途_生产方法_化学性质

核糖核酸酶A是内切核糖核酸酶,可特异地攻击RNA上嘧啶残基的3'端,切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。反应终产物是嘧啶3'磷酸及末端带嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。无辅因子及二价阳离子存在时,核糖核酸酶A的作用可被胎盘RNA酶抑制剂(B1ackburnetal.1977)或氧钒—核糖核苷复合物(Puskasetal.1982)所抑制。

 

核糖核酸酶A用途

生化研究,测定核酸的结构

RNase保护检测

去除非特异结合的RNA

分析RNA序列

水解蛋白样品中的RNA

纯化DNA

此外,它具有显著的细胞毒性,可以杀灭许多肿瘤细胞系,可以抑制导致艾滋病的HIV-1病毒在细胞中的复制,可以治疗乙肝。

1、从DNA-RNA或RNA—RNA杂合体中去除未杂合的RNA区。

2、确定DNA或RNA中单碱基突变的位置(Myersetal.1985,Winteretal.1985)。在此方法中,RNA-DNA或RNA-RNA杂合体上的单碱基错配可被RNA酶A识别并切割。利用含SP5或T7噬菌体启动子的质粒,在体外合成与野生型DNA或RNA互补的32p标记RNA探针,然后与待检含单碱基置换的DNA或RNA退火,所产生的单碱基错配可用RNA酶A切割,通过凝胶电泳分析切割产物的大小即可确定错配的位置。在所有各种可能的单碱基错配中,大约50%可用此法确定。

 

核糖核酸酶A生产方法

由红霉素产生的蓖的发酵液提取。

以牛胰为原料,稀硫酸匀浆后用硫酸铵分级沉淀,再经重结晶、羧甲基纤维素柱层析得产品。

以牛胰为原料稀酸抽提后用硫酸铵分级沉淀,在乙醇中重结晶制取。

 

核糖核酸酶A化学性质

白色结晶或冻干粉,易溶于水,pI7.8,zui适pH值7.7。稳定性:zui稳定pH范围2-4.5,冷藏冻干粉或结冻的酶液可保存数年活力不变。抑制剂有脱氧核糖核酸(竞争性抑制剂)、变性脱氧核糖核酸(比天然的更有效)、0.0005mol/LMg2+。酶反应:专一催化核糖核酸的核糖部分3'和5'磷酸二酯键的裂开,形成具有2',3'-环磷酸衍生物寡聚核苷酸。

 

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