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正确保存抗体,你都做对了吗
abcam的抗体大多以液体形式提供。若保存得当,大多数抗体可以保存数个月甚至数年。收到抗体后如何操作?如何正确保存抗体?不同类型抗体储存时候是否有差异?请查看abcam抗体保存指南。
为了避免反复冻融造成的抗体结合能力降低,很多抗体的最佳保存条件是分装成小包装冻存于-20°C或-80°C。分装能使冻融引起的损失减到最小,同时可避免多次在一个管内取样而由枪头引入的污染。 收到抗体后,应10000g离心20秒,使管口螺纹内的抗体溶液全部离心至管底,用低蛋白吸附性的微量离心管分装。分装量的多少取决于每次试验的使用量。分装量不能少于10μl;分装量越少,由于蒸发和吸附于管内壁而引起的损失会越大。 避免使用无霜冰箱来保存抗体。解冻后的分装抗体应保存于4°C,一般可以保存1-2周。稀释至工作浓度的抗体最好不要在4°C保存超过一天时间。 一些研究者为了防止抗体反复冻融,在抗体中加入终浓度为50%的甘油作为抗冻剂。甘油可以将冰点降低至-20°C以下。很多抗体都可以这样做,由于-80°C低于甘油的冰点,所以加了甘油的溶液不应保存于-80°C。注意,甘油可能会被细菌污染。如果要加入甘油或其他防冻剂,应注意无菌处理。 注:abcam提供的抗体只有一小部分测试了这种保存条件下的稳定性。 酶联抗体不应冻存,冻融会降低酶的活性,同时影响抗体的吸附能力。一般放置在4°C可保证稳定。 共轭标记的抗体,无论是标记的荧光染料、酶还是生物素,都应保存于深色的管内并包裹上铝箔。如果暴露在光线下可能会减弱共轭标记物的活性。荧光标记物尤其容易受到光漂白作用,整个实验过程中均应避光。 免疫球蛋白G3同种型抗体冻融后易形成聚合物,因此应一直保存于4°C。 通常蛋白质在较高浓度保存时不易发生降解,理想浓度为1mg/ml或更高,因此很多抗体溶液中包含了如牛血清白蛋白等蛋白质稳定剂。在说明书的“保存缓冲液”部分会有描述。 为防止微生物污染,在抗体溶液中应加入叠氮化钠,终浓度为0.02%(质量百分比)。很多abcam的抗体已经包含了0.02-0.05%的叠氮化纳,在说明书的“保存缓冲液”部分会有描述。 什么时候不能用叠氮化钠 叠氮化纳对大多数有机体都有毒性,会阻断细胞色素电子传递系统的信号。如果用抗体标记活细胞,或用于体内实验,确保所用抗体中不含叠氮化钠。 另外,叠氮化钠会干扰胺基的共轭标记。因此用于标记的抗体溶液中也不应该含有叠氮化纳。标记后抗体可保存于叠氮化纳,也可用不含胺基的硫柳汞替代。 叠氮化钠分子量较小,可用透析或凝胶过滤法从抗体溶液中除去。免疫球蛋白G的分子量是150,000道尔顿(免疫球蛋白M的分子量是600,000道尔顿),叠氮化钠的分子量是65道尔顿。使用14000道尔顿的微量透析装置,可以去除抗体溶液中的叠氮化纳。
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