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2021-07-27【求助】如何保证得到的cDNA片段中没有反转录酶引起的突变存在？

kingoldfive
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如题

反转录酶没有3-5外切活性，其保真度怎么保证呢？

大家做表达的时候，获取长CDNA片段怎么保证的呢？

我获得的2.5kb的片段，其中sequencing后发现有8个错突变，狂ft

高保真的KOD-PLUS扩增的，按道理说，PCR没这么夸张吧

请大家指点啊
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相关回复

已帮助 0人

回复：时间：2005-12-29

没人问津啊，自己顶一下各位用过的一定给帮忙啊，很困惑的说

有用（0）

已帮助 0人

回复：时间：2005-12-29

Invitrogen的SuperscriptII或IIIKIT都是很好的反转录试剂盒，我用着感觉不错另外，您用的是反转录后的CDNA直接为模版进行PCR的，这样CDNA不一定很完整，直接P2.5KB的片断可能出现产量小或者错误多的情况。建议您将片断分成两段PCR后酶切连接。本人意见，仅供参考

有用（0）

已帮助 0人

回复：时间：2006-01-04

--------------------------------------------------------------------------------不好意思上面有句话写错了是不是M－MLV反转录酶都有末端加C的功能啊？

有用（0）

已帮助 0人

回复：时间：2006-01-05

我也想知道答案，没钱买试剂盒。

有用（0）
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