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如题
反转录酶没有3-5外切活性，其保真度怎么保证呢？
大家做表达的时候，获取长CDNA片段怎么保证的呢？
我获得的2.5kb的片段，其中sequencing后发现有8个错突变，狂ft
高保真的KOD-PLUS扩增的，按道理说，PCR没这么夸张吧
请大家指点啊
反转录酶没有3-5外切活性，其保真度怎么保证呢？
大家做表达的时候，获取长CDNA片段怎么保证的呢？
我获得的2.5kb的片段，其中sequencing后发现有8个错突变，狂ft
高保真的KOD-PLUS扩增的，按道理说，PCR没这么夸张吧
请大家指点啊
相关回复
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回复：时间：2005-12-29
Invitrogen的SuperscriptII或IIIKIT都是很好的反转录试剂盒，我用着感觉不错另外，您用的是反转录后的CDNA直接为模版进行PCR的，这样CDNA不一定很完整，直接P2.5KB的片断可能出现产量小或者错误多的情况。建议您将片断分成两段PCR后酶切连接。本人意见，仅供参考
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回复：时间：2006-01-04
--------------------------------------------------------------------------------不好意思上面有句话写错了是不是M－MLV反转录酶都有末端加C的功能啊？
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