货号：	USCN50462
样本：	样本类型：细胞上清液，血清，血浆,组织,细胞培养提取物
适应物种：	人，大鼠，小鼠
应用：	ELISA定量检测，定性检测
检测方法：	ELISA
供应商：	北诺生命科学
数量：	1000
规格：	96T

使用前彻底阅读说明书。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

【工作原理】
。所提供的ELISAKit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
【每套试剂盒中内容】(96T)

材料数量
标准品96T(2vial)
预包被抗体的96孔板96T（8×12）
生物素标记人ANG抗体96T(1:100)
ABC（亲和素-过氧化物酶复合物）96T(1:100)
样品稀释液96T×2
抗体稀释液96T×1
ABC稀释液96T×1
TMB显色液A96T×1
TMB显色液B96T×1
TMB终止液96T×1
ELISA专用洗涤液96T×1(1:25)

【需要而未提供的试剂和器材】
1．37℃恒温箱。
2．标准规格酶标仪。
3．自动洗板机。
4．单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5．蒸馏水，容量瓶等
6．干净的试管和Eppendof管。

【注意事项】
1.从-20℃取出的试剂盒，最好在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。
2.开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
3.配制各种试剂时，切记混匀！
4.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
5.建议所有标准品、样本都做双份检测。
6.要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
7.为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

【洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

【样品的准备和保存】
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

【样品稀释的一般原则】
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。

【试剂的准备和保存】
A.标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，彻底溶解后做倍比稀释。
8稀释后的标准品在2小时内使用。

B．生物素标记抗体工作液：在使用前2小时内准备。
1．根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。
2．按10ul生物素标记抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。
1．根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。
2．按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

D.TMB显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显色液A9份加TMB显色液B1份的比例配制TMB显色工作液。

【操作程序】
1．确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2．将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3．酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4．反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5．将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6．0.01MTBS或0.01MPBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7．将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8．0.01MTBS或0.01MPBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9．按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应最长不要超过30分钟）。
10．用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11．根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。

【操作程序总结】：
准备试剂，样品和标准品

加入准备好的样品和标准品，37℃反应90分钟

洗板2次，加入生物素化人ANG抗体工作液，37℃反应60分钟

洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30分钟

洗板5次，加入TMB显色液，37℃反应

加入TMB终止液

30分钟之内读OD值

计算标本待测因子含量

 

【特异性】：系统和其它细胞因子无交叉反应。
【保存】：-20℃[短期内（如两周）可4℃
【有效期】：12个月（-900℃）。
【用途】：用给我留言于体外定量分析液体标本（通用型）。

6．0.01MTBS或0.01MPBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。7．将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。8．0.01MTBS或0.01MPBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。9．按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应最长不要超过30分钟）。10．用酶标仪在450nm测定O.D.值。11．根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。【操作程序总结】：准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37℃反应90分钟洗板2次，加入生物素化人ANG抗体工作液，37℃反应60分钟洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30分钟洗板5次，加入TMB显色液，37℃反应加入TMB终止液30分钟之内读OD值计算标本待测因子含量【特异性】：系统和其它细胞因子无交叉反应。【保存】：-20℃[短期内（如两周）可4℃【有效期】：12个月（-900℃）。【用途】：用给我留言于体外定量分析液体标本（通用型）。bio-equip.com