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各位大神求助,本人用TATARA的逆转录试剂盒进行逆转录过程,该过程为37度15分钟,85度5秒一个循环完成,我没注意今天让它跑了25个循环,反应体系里包含总RNA,逆转录引物(oligodT和随机引物6),dNTP,这样子会反复扩增CDNA么?因为有底物有引物在85度条件下不知道RNA会不会失活,就算RNA失活,以cDNA为模板,会不会进行扩增呢?谢谢各位啦
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回复:时间:2017-12-18
剑藏鞘拉出来跑个电泳就知道有没有扩增了先谢谢您了,请教一下1.CDNA可以跑电泳吗?因为引物有两种我估计会跑成一条带,就是整个mRNA逆转录的样子,我之前跑是这样的。2.如果扩增了理论上应该是什么样子呢?我想就是cDNA浓度变得很高,亮度很大?3,想请教一下85度条件下RNA会失活吗?如果没有会不会以RNA和cDNA为模板一直复制,谢谢!
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回复:时间:2017-12-23
我自己补充一下,我觉得这个影响就是第一轮37度扩增后,85度逆转录酶失活,双链解开,后面重复的过程就是把CDNA多煮了两分钟,我考虑到可能cDNA会降解,但是后续我会试一下能不能p出来,就当留在这里当心得了
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