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各位大神求助，本人用TATARA的逆转录试剂盒进行逆转录过程，该过程为37度15分钟，85度5秒一个循环完成，我没注意今天让它跑了25个循环，反应体系里包含总RNA，逆转录引物(oligodT和随机引物6)，dNTP，这样子会反复扩增CDNA么？因为有底物有引物在85度条件下不知道RNA会不会失活，就算RNA失活，以cDNA为模板，会不会进行扩增呢？谢谢各位啦
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回复：时间：2017-12-18
剑藏鞘拉出来跑个电泳就知道有没有扩增了先谢谢您了，请教一下1.CDNA可以跑电泳吗？因为引物有两种我估计会跑成一条带，就是整个mRNA逆转录的样子，我之前跑是这样的。2.如果扩增了理论上应该是什么样子呢？我想就是cDNA浓度变得很高，亮度很大？3，想请教一下85度条件下RNA会失活吗？如果没有会不会以RNA和cDNA为模板一直复制，谢谢！
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回复：时间：2017-12-23
我自己补充一下，我觉得这个影响就是第一轮37度扩增后，85度逆转录酶失活，双链解开，后面重复的过程就是把CDNA多煮了两分钟，我考虑到可能cDNA会降解，但是后续我会试一下能不能p出来，就当留在这里当心得了
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