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对于使用染料法的定量PCR反应，虽然有各种各样的pcr引物设计软件或者经验公式计算熔解温度tm值，但运用的公式不同、引物序列不同，tm值的差异会很大。

引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，基因扩增仪价格，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度pcr的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指l定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出适合的反应条件。

不单退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如invitrogen、clontech、promega的多数高保真taq酶来说这个非常重要，基因扩增仪，因为taq和校正酶的l佳反应温度可能有显著差异，优化延伸温度就显得很重要。

PCR仪有着不同的种类，除了常见的普通的pcr仪外，还有种实时荧光定量pcr仪，今天君意生物的小编就和大家一起来了解一下实时荧光定量pcr仪：

荧光定量pcr仪有单通道，pcr基因扩增仪厂家，双通道，和多通道。当只用一种荧光探针标记的时候，选用单通道，有多荧光标记的时候用多通道。单通道也可以检测多荧光的标记的目的基因表达产物，因为一次只能检测一种目的基因的扩增量，需多次扩增才能检测完不同的目的基因片段的量。

它主要用于医学---检测，食品行业，科研院校等机构。

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