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我做肉瘤的免疫组化,一抗用的ABCom,二抗和DAB用的博士德,但是做了几次都没有任何染色。由于烘箱60度烤片我只烤了20分钟,可能时间短了,但苏木素可以染上,是否说明烤片、脱蜡已足够。
用双氧水去除过氧化物酶时,我是自己配的3%双氧水滴到片上而非将片浸入双氧水,这样可否?
用博士德的DAB染色,配制方法为:1mlH20中加入DAB、H2O2、TBS各一滴,我配制的时候发现将DAB加入H20时很容易沉淀,要震荡才能混匀,且将配好的DAB滴到玻片上时,DAB会结为很小块的微颗粒悬浮在液体中但并不染色,是否DAB有问题?
现在打算换中衫的试剂盒,代理商说中衫的试剂盒包括了二抗和DAB,想请教一下该试剂盒的具体内容有些什么?
万分感谢!
用双氧水去除过氧化物酶时,我是自己配的3%双氧水滴到片上而非将片浸入双氧水,这样可否?
用博士德的DAB染色,配制方法为:1mlH20中加入DAB、H2O2、TBS各一滴,我配制的时候发现将DAB加入H20时很容易沉淀,要震荡才能混匀,且将配好的DAB滴到玻片上时,DAB会结为很小块的微颗粒悬浮在液体中但并不染色,是否DAB有问题?
现在打算换中衫的试剂盒,代理商说中衫的试剂盒包括了二抗和DAB,想请教一下该试剂盒的具体内容有些什么?
万分感谢!
相关回复
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回复:时间:2009-05-03
作为一个刚刚开始尝试免疫组化的菜鸟,友情帮你顶一下。我觉得没有染色是否还是要多往前期组织处理、抗原修复以及1抗是否可靠这些方面考虑些,烤片不充分容易脱片,H2O2封闭内源性酶不佳容易背景着色,这些不会造成染色阴性啊。我用的染色试剂盒里含3mlH2O2,也是取50ul滴在玻片上,片子的背景有点高,不过应该不是H2O2的问题。DAB配制的时候要注意三种试剂A、B、C的顺序,先把A加进去混匀吧?中杉的染色试剂盒有几种,里面含什么东西它的网站上应该有说明的,可以去看一下选择。
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