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我做肉瘤的免疫组化，一抗用的ABCom，二抗和DAB用的博士德，但是做了几次都没有任何染色。由于烘箱60度烤片我只烤了20分钟，可能时间短了，但苏木素可以染上，是否说明烤片、脱蜡已足够。
用双氧水去除过氧化物酶时，我是自己配的3%双氧水滴到片上而非将片浸入双氧水，这样可否？
用博士德的DAB染色，配制方法为：1mlH20中加入DAB、H2O2、TBS各一滴，我配制的时候发现将DAB加入H20时很容易沉淀，要震荡才能混匀，且将配好的DAB滴到玻片上时，DAB会结为很小块的微颗粒悬浮在液体中但并不染色，是否DAB有问题？
现在打算换中衫的试剂盒，代理商说中衫的试剂盒包括了二抗和DAB，想请教一下该试剂盒的具体内容有些什么？
万分感谢！
用双氧水去除过氧化物酶时，我是自己配的3%双氧水滴到片上而非将片浸入双氧水，这样可否？
用博士德的DAB染色，配制方法为：1mlH20中加入DAB、H2O2、TBS各一滴，我配制的时候发现将DAB加入H20时很容易沉淀，要震荡才能混匀，且将配好的DAB滴到玻片上时，DAB会结为很小块的微颗粒悬浮在液体中但并不染色，是否DAB有问题？
现在打算换中衫的试剂盒，代理商说中衫的试剂盒包括了二抗和DAB，想请教一下该试剂盒的具体内容有些什么？
万分感谢！
相关回复
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回复：时间：2009-05-03
作为一个刚刚开始尝试免疫组化的菜鸟，友情帮你顶一下。我觉得没有染色是否还是要多往前期组织处理、抗原修复以及1抗是否可靠这些方面考虑些，烤片不充分容易脱片，H2O2封闭内源性酶不佳容易背景着色，这些不会造成染色阴性啊。我用的染色试剂盒里含3mlH2O2，也是取50ul滴在玻片上，片子的背景有点高，不过应该不是H2O2的问题。DAB配制的时候要注意三种试剂A、B、C的顺序，先把A加进去混匀吧？中杉的染色试剂盒有几种，里面含什么东西它的网站上应该有说明的，可以去看一下选择。
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