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想要做好基因编辑,你需要以下几个重要工具
CRISPR是最新一代的基因组编辑技术,与之前的ZFN,TALENs技术相比,该技术不再采用蛋白作为识别基因组靶点位点引导者,改换为一条简短的RNA引导Cas系列核酸酶特异性识别基因组序列上的特定位点。从生物合成的角度上来说,合成一小段RNA比合成一段特异性肽链要简单的多,从费用上来说,合成RNA的费用比合成肽链的费用要便宜很多。这也是CRISPR基因组编辑技术从一出现就受到生物学家们热烈追捧的原因。
简单讲一下CRISPR的运作机制:
CRISPR系统原本是细菌用来抵抗病毒侵入的一种免疫系统。在细菌的基因组中存在一段特殊的序列片段,被称为CRISPR簇,该片段中存在多个短而高度保守的重复序列区以及多个间隔区域,并由一个前导区作为启动子序列。其中间隔区域中的序列信息,是上一次病毒入侵时,细菌运用自身机制将病毒基因切断后存储在自身体内的记忆基因片段。
在CRISPR簇的上游基因序列是一个多态性家族基因,翻译后的蛋白统称为Cas家族蛋白,这一系列的蛋白均含有可与核酸发生作用的功能域,具有核酸酶、解旋酶、整合酶等活性。该家族蛋白分多种类型,其中II型系统中只需要一种蛋白,及Cas9蛋白就可发挥核酸酶的作用。

科学家们发现了细菌体内这一机制后,迅速发现这一机制无论是在动物细胞,还是植物细胞内,都可以发挥同样的作用,所以CRISPR基因组编辑技术也在很短时间内应用于各个方面。很多科学家也在不断的优化这一技术,使其能达到更高的效率。例如,在细菌的II型CRISPR系统中,主要的工作原件包括crRNA,tracRNA以及Cas9蛋白,但是在实际的操控中,实验人员直接将后期crRNA和tracRNA形成的复合RNA设计为一条RNA,即目前我们最常听到的sgRNA(singleguideRNA),减少了CRISPR系统工作的组件,同时提高了工作效率。

1.sgRNA
2.Cas9蛋白
在开展基因组编辑工作之前,准备好这两大工作元件,无疑是一个好的开端。博雅辑因目前已经拥有上千种的单克隆基因敲除细胞系,在制备这些细胞系的过程中,同样用到这两大组件,并且在我们成功生成出相应的单克隆基因敲除细胞系后,这些组件变成了非常重要而且经验证过的CRISPR组件。现在,我们将这些组件包装后作为产品提供给用户,希望客户能在100%成功案例的前提保障下,也能在自己的实验室成功的完成自己的基因组编辑实验!
具体产品可点击下列链接
1.经验证的sgRNA(点击进入链接,输入基因名称查询相应sgRNA)
http://edigene.biomart.cn/supply/c_203730.htm
2.Cas9稳定表达细胞系
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