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NEB T4连接酶T4 DNA Ligase清仓大促 M0202V 高反应效率 粘性末端和平齐末端均可连接
产品概述:
该酶催化契合的双链DNA或RNA的5′-磷酸末端和3′-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接,还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切刻(1)。纯化自E.coliC600pcl857pPLc28lig8(2)。
反应条件:
1*T4 DNA 连接酶缓冲液[50mMTris-HCl(pH7.5@25℃),10mMMgCl2,10mMDTT,1mMATP]。推荐DNA5末端浓度为0.1-1.0μM,16℃温育。
室温连接反应
为方便起见,连接反应可以在室温(20-25℃)条件下进行。粘性末端连接:在20μl反应体系中加入1μlT4DNA 连接酶,反应10 分钟。平齐末端连接:在20μl 反应体系中加入1μlT4DNA连接酶反应2小时,或者加入1μl高浓度T4DNA 连接酶反应10分钟。
使用注意
与大肠杆菌DNA连接酶需要NAD+作辅因子不同,T4DNA连接酶的辅因子是ATP。
稀释后的T4DNA连接酶应保存于-20℃,50%甘油贮存缓冲液(稀释缓冲液A,NEB#B8001)。如稀释后马上使用,则可用1XT4DNA连接酶反应缓冲液稀释。
只要在反应体系中补加1mMATP,连接反应就可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液(NEBuffer-s)或在T4DNA多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。
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