DNA的酶切与连接一质粒DNA酶切相关交流-蚂蚁淘在线

DNA的酶切与连接一质粒DNA酶切

mayitao /发布时间:1632331802 /浏览量:233

================ 蚂蚁淘在线 ================

免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容

相关阅读

/**/

实验方法原理	限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异性位点上，并切割双链DNA。
实验材料	标准pUC19（2686bp）
试剂、试剂盒	EcoRI及其配套的酶切缓冲液0.5×TBE电泳缓冲液6×LoadingBufferGoldview琼脂糖
仪器、耗材	水平电泳仪水浴锅移液器微波炉成像设备
实验步骤	1.在200ul的离心管中，按照下表加入试剂（单位：ul），混匀；点动离心将反应液甩至管底。37℃保温2h进行酶切反应。 2.反应结束后，加入2ul 10×LoadingBuffer钝化酶活性；（或：65℃，保温20min使酶失活）。 3.电泳检测。酶切阴性对照：pUC19标样+10×LoadingBuffer2ul 酶切样品：标准pUC19酶切样品10ul+10×LoadingBuffer2ul 4.质粒及酶切样品电泳预期结果。
注意事项	影响酶切的因素：在酶切反应中，DNA的纯度、缓冲液中的离子强度、Mg²⁺等因素均可影响反应，一般可通过增加酶的用量，延长反应时间等措施以达到完全酶切。但应注意的是，过多的酶量和过长的反应时间会造成非特异性的酶切（星号活性）。
其他	可以采用无缝克隆作为替代方案进行基因重组。