丁思思 刘翠平 吴鸿雅 张学光 【摘要】：目的:负性共刺激分子B7-H4在免疫调节中起重要作用。本研究旨在研制特异性的鼠抗人B7-H4单克隆抗体,并初步鉴定其生物学特性。研制特异性检测人可溶性B7-H4(sB7-H4)的ELISA试剂盒,为定量分析不同来源的临床标本和研究B7-H4的功能提供有效的检测手段。方法:以高表达人B7-H4分子的转基因细胞CHO/B7-H4免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术将骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾脏细胞进行融合,运用流式细胞术对杂交瘤细胞的培养上清进行初筛,将合格的杂交瘤细胞株反复检测和亚克隆,成功获得三株特异性好且能够持续稳定分泌鼠抗人B7-H4单抗的杂交瘤细胞株;采取CBA法和快速定性试纸法鉴定抗体亚型;通过Western blot和ELISA以及两株单抗之间竞争实验分析所得单抗的生物学特性;用流式细胞术和间接免疫荧光分析B7-H4在多种肿瘤细胞表面的表达水平。利用本实验室自主研制的anti-B7-H4 mAb(5C2)作包被抗体,biotin-anti-B7-H4mAb(XANO.7)作为检测抗体,建立双抗体夹心sB7H4酶联检测试剂盒,同时进行试剂盒稳定性和精确性进行分析。结果:成功获得三株持续、稳定分泌鼠抗人B7-H4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5C2、11G4和XANO.7,单克隆抗体5C2和11G4的重链为IgG1,XANO.7的重链为IgG2a,轻链均为κ链;抗体可用于进行流式细胞术、Western blot、免疫组化等检测;竞争实验结果显示5C2和11G4两株单克隆抗体与XANO.7抗体识别不同的抗原位点;功能实验结果显示11G4可能为阻断性抗体。成功建立了检测人sB7-H4的ELISA体系,该方法能特异性测定人sB7H4蛋白,而与其他蛋白无交叉反应,试剂盒检测标准曲线在B7-H4.Fc蛋白浓度为1.5625-100ng/ml区间内呈现良好的线性关系。该方法具有良好的稳定性和精确性。结论:成功获得三株特异性鼠抗人B7-H4单克隆抗体,为研究B7-H4的生物学特性提供良好的工具。建立了特异性检测人sB7-H4的ELISA试剂盒,为定量分析血清中该分子的表达提供了有效的检测手段。 贲其稳;赵缜;周琳;陈达凡;刘军;袁耀宗;;检测骨膜素ELISA试剂盒的制备与初步应用[J];现代免疫学;2009年01期 许晓群,田志刚,张建华,冯进波,五郡甫,孙汭;检测IL-6的ELISA试剂盒的研制[J];上海医学检验杂志;1999年01期 吴坚美,朱波,朱有名,吴围屏,邵金辉,韩金祥;改良人巨细胞病毒抗体ELISA试剂盒的研制及质量鉴定[J];山东医药;2005年20期 汪保安,汪寅章,夏风城,陆思珍,黄兆坚,郭爱岩,马芳玲,张育青;ACTH单克隆抗体的制备和鉴定[J];中国免疫学杂志;2001年02期 任新玲,沈丽英,金伯泉,井晓梅,王睿;表皮生长因子受体单克隆抗体抗肺癌作用的研究[J];第四军医大学学报;2000年03期 李凤英,陈名道,顾卫琼,陈春荣,唐金凤;人瘦素单克隆抗体的鉴定[J];放射免疫学杂志;2000年02期 孙大军,杨淑华,李亚萍,杜建时,祁功才;利用重组人VEGF165制备单克隆抗体的研究[J];白求恩医科大学学报;2001年05期 路璐;王月英;吴红英;李德冠;孟爱民;韩佩珍;;人血清抵抗素ELISA试剂盒的研制及其初步临床应用[A];全国生化与分子药理学药物靶点研讨会论文摘要集[C];2008年 路璐;王德芝;张春明;赵明辉;韩佩珍;;人抵抗素ELISA试剂盒的研制及其初步临床应用[A];第四届中国核学会省市区“三核”论坛论文集[C];2007年 路杨;周宁;孙欣;赵玉芬;;磷试剂辅助下氨基酸均肽库生物活性的ELISA试剂盒检测[A];第六届全国磷化学化工学术讨论会论文摘要集[C];2003年 徐爽;安万新;胡荣花;叶萍;孟祥昱;;不同方法收集单克隆抗体浓缩后的比较[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年 刘大维;高斌;;狂犬病毒单克隆抗体的研制[A];2010年中国科学院微生物研究所博士后学术年会暨第二届博谊论坛论文摘要集[C];2011年 陈炅;;治疗性单克隆抗体的作用靶点及临床应用[A];2013年中国临床药学学术年会暨第九届临床药师论坛论文集[C];2013年 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年 彭虹;舒翠丽;刘永全;王华;高杰英;;抗人α4单克隆抗体的制备和鉴定[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年 祭芳;史建荣;陈正贤;徐剑宏;陆琼娴;;抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年 张光波;董秋明;於葛华;李文香;张学光;;一株鼠抗人4-1BB单克隆抗体的研制及其生物学功能的鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年