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标记亲和素生物素法（BAELISA）实验一检测未知抗原
mayitao
/发布时间:1533580426 /浏览量:100
| 实验方法原理 | 亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，对生物素有非常高的亲和力（结合常数高达1015M-1）。生物素很易与蛋白质（如抗体等）以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原（或抗体）分子的目的。 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 生物素化抗体 试剂、试剂盒 | 酶标记的亲和素
实验步骤 | 1. 包被抗体：用0.05mol/LpH9.6碳酸盐缓冲液将已知抗体作适当稀释，在每个聚苯乙烯酶标板的反应孔中加0.1ml，于4℃过夜（18～24h）。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3min（简称洗涤，下同）。 2. 加样：加入待检样品（未知抗原）或作适当稀释的标准参考品于反应孔中，同时作空白孔、阴性和阳性孔对照。37℃孵育1h，洗涤。 3. 加B-Ab：已作适当稀释的生物素化抗体（B-Ab），每孔加0.1ml，37℃孵育30～60min。洗涤。 4. 加A-HRP：已作适当稀释的辣根过氧化物酶标记的亲和素（A-HRP），每孔加0.1ml，37℃孵育30～45min。洗涤4次。 5. 底物显色：于上述各反应孔中加入临时配制的TMB（或OPD）底物应用液0.1ml，于37℃孵育10～30min。再加2mol/LH2SO40.05ml以终止反应。 6. 结果判定：目测或在ELISA比色仪上测OD值（见ELISA部分）。
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