1. 准备下列器械并消毒（高压灭菌，或者可能的话一次性使用）：

大剪刀（两把）

刮刀（两或三把）

胰蛋白酶消化的烧瓶（每 30 g 绞碎样品一个）

带接液器的 250-μM 钢筛网

15-ml 和 50-ml 离心管

2. 分离组织样品。所有操作在层流柜中进行。

(1) 从腹整形样品分离

① 解剖样品，去除任何皮肤、筋膜、肌肉等，只保留脂肪组织。称重样品，每 10 g 分装一份。

② 在无菌盘上，用剪刀将样品剪碎。

③ 用 60 ml 注射器（不带针头）吹吸样品，反复3次或至样品充分液化。

④ 取 20 ml 组织放入装有 20 ml PBS 的 50 ml 离心管，混匀，700 r/min 离心 5 分钟吸出含血水相，重复操作，直至样品相对无血。

(2) 从吸脂样品分离

① 置真空包装样品于筛网上，用含 0.5 μg/ml 两性霉素和 200 IU/ml 庆大霉素，200 μg/ml 链霉素的 PBS 反复冲洗。冲洗过程中用刮刀在被冲洗物周围搅动，辅助冲洗。

② 取 20 ml 组织放入装有 20 ml PBS 的 50 ml 离心管，混匀，700  r/min 离心 5 分钟。吸掉含血水相。

3. PBS 溶解 BSA 至终浓度 4.0 mg/ml（PBS/BSA）；过滤除菌。配制胶原酶溶液，PBS/BSA 溶解胶原酶和 DNA 酶，终浓度分别为 4.0 mg/ml 和 0.02 mg/ml，0.2 μM 滤膜过滤除菌。

10 ml 溶液大约可以处理 10 ml 脂肪样品。

4. 用无菌刮刀把步骤2中剪碎的脂肪组织刮到胰蛋白酶消化的烧瓶中，然后加入胶原酶，每毫升组织加 1 ml。

5. 37℃ 80 r/min 旋动保温 30 分钟。

6. 消化的同时，用 PBS 稀释 PBS/BSA（4.0 mg/ml BSA）至 BSA 终浓度 0.2 mg/ml。

7. 消化样品倒入 50 ml 离心管（每管约 20 ml）。

8. 吊筒式医用台式离心机室温 1500 r/min 离心 5 分钟。

9. 液态脂和水相倒入另一 50 ml 离心管。由于细胞沉淀极易被倒掉，最好使用无菌离心管。

10. 细胞重悬于 5 ml PBS（0.2 mg/ml BSA），1500 r/min 离心 5 分钟，倒掉上清。沉淀悬于 1 ml 含 5% FCS 的 PBS（PBS/FCS）中。

1. 短暂振荡，使磁珠溶液均一。

2. 用 PBS 稀释 PBS/BSA（4.0 mg/ml BSA）至 BSA 终浓度 0.2 mg/ml。

3. 取 100 μl 磁珠（1 mg）加 2 ml 含 0.2 mg/ml BSA 的 PBS（20 倍稀释磁珠混合物）。混匀，用钴-钐磁体分离样品。

4. 弃上清，沉淀悬于 100 μl PBS（含 BSA 0.2 mg/ml）。

5. 磁珠偶联抗 PECAM 抗体。

抗人 CD-31（PECAM）单克隆抗体

6. 用磁体从上清中分离磁珠，弃上清。每毫克磁珠加 3 ml PBS/BSA（0.2 mg/ml BSA），混匀，用磁珠分离。

7. 重复步骤6一次。

8. 磁珠悬于 100 μl PBS/BSA（0.2 mg/ml BSA），4℃ 可贮存数周。
1. 向“分离样品的制备”步骤10的细胞样品中加入 30 μl 偶联了抗 PECAM 抗体的磁珠。

2. 细胞和磁珠混合物冰上保温 15 分钟。

3. 磁体置于管侧 5 分钟，吸引筛选样品向磁体移动。小心吸弃上清，移开磁体。

4. 向磁珠中加 2 ml PBS/FCS，轻轻混匀，确保没有大的团块。用磁体重复筛选。

5. 重复步骤3和4三次。

6. 磁粒悬于 1 ml 接种培养基中。

7. 重悬细胞接种明胶包被的 T25 板，每 10 g 脂肪组织分离的细胞接种一块 T25 板。37℃ 振动培养。

8. 细胞长至足够密度时传代，在最初的两次传代中要应用筛选程序，确保内皮细胞纯度。

您知悉并同意，丁香通平台展示产品并非为平台自身产品，您发起询价或试用申请后，平台将会把您已提供或按要求提供的相关信息同步提供至所咨询的具体产品商家，由商家为您提供具体产品的价格咨询或产品试用注意事项及相关试用产品或完成相应购买，因此您知悉并授权平台将您的信息进行同步共享。您有权拒绝，但您知悉将无法参加询价或试用活动。