去垢剂

2021-07-20RIPA提蛋白后总有透明粘稠的胶冻样物质,求解决办法

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RAW细胞,6孔板,RIPA提取蛋白(提前加好PMAF),每孔100uLRIPA,冰上用tip倒过来刮细胞,放置15min,12000gX15min离心,取上清。做WB时,沸水煮5min,胶冻样物质还是存在。

操作过程中发现离心后还是有胶冻样物质,和上清混在一起无法分开,严重的时候基本上全是胶冻样物质。

这个胶冻样物质应该是DNA,园友提供的方法为用超声碎裂器,但是我们实验室没有。请问还有别的方法可以使用么?

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回复:时间:2016-07-02

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回复:时间:2016-06-29

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回复:时间:2016-06-28

用胰酶消化试试,细胞划得话容易出这个问题

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回复:时间:2016-07-02

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回复:时间:2016-07-05

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回复:时间:2016-07-06

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回复:时间:2016-06-28

可以使用那种小注射器带针头的,反复抽打样品

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回复:时间:2016-07-03

去垢剂加少了

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回复:时间:2016-06-27

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回复:时间:2016-07-08

shylook去垢剂加少了去垢剂是什么

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回复:时间:2016-07-08

展开引用山依凉月shylook去垢剂加少了去垢剂是什么......SDS

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回复:时间:2016-07-06

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回复:时间:2016-07-04

胶冻样的东西是DNARIPA的裂解力度很强推荐六孔板每孔加200微升这样降低DNA的浓度再去煮应该出胶东的可能性就小如果还不行建议改裂解液配方为triton-100或NP-40

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回复:时间:2016-07-06

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回复:时间:2016-07-06

我一般都把这坨东西直接吸走,小心点挑出来就好了

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回复:时间:2016-06-28

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回复:时间:2016-07-07

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回复:时间:2016-07-04

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回复:时间:2016-07-02

样品太浓,DNA释放出来了http://dwz.cn/3Ni78j使用ImageJ进行条带灰度扫描

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回复:时间:2016-07-05

展开引用claire萱RAW细胞,6孔板,RIPA提取蛋白(提前加好PMAF),每孔100uLRIPA,冰上用tip倒过来刮细胞,放置15min,12000gX15min离心,取上清。做WB时,沸水煮5min,胶冻样物质还是存在。操作过程中发现离心后还是有胶冻样物质,和上清混在一起无法分开,严重的时候基本上全是胶冻样物质。这个胶冻样物质应该是DNA,园友提供的方法为用超声碎裂器,但是我们实验室没有。请问还有别的方法可以使用么?......体积小超声会有液体飞溅造成损失,每个样品都加点DNase消化一会就行了

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回复:时间:2016-07-01

我的也这样求解。

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回复:时间:2016-06-30

请问可以把使用超声碎裂器提取细胞的方法发给我看一下吗?非常感谢!另外,看看这个有没有帮助?http://wenku.baidu.com/link?url=SgeFb3fszuHss8uqw2hvenhShYED7uGh6B5pGKwnqM1YvJpqOY2JqbSGG6qwcIzqssA3WjHxNqwDPzuNtHK1S5CgVJmNeEeRkcbHZDqvm3W

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回复:时间:2016-07-05

6孔板才加100ul裂解液,少了一点,应该加到500-1000ul,用RIPA裂解细胞样品总会出现胶冻样物质,增加裂解液和反复吹打多几次,RAW细胞本来就不太好裂解,需要增加裂解时间到15-20分钟

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回复:时间:2016-07-06

zyz突破局限6孔板才加100ul裂解液,少了一点,应该加到500-1000ul,用RIPA裂解细胞样品总会出现胶冻样物质,增加裂解液和反复吹打多几次,RAW细胞本来就不太好裂解,需要增加裂解时间到15-20分钟而且在6孔板中裂解,裂解20分钟左右后再用tips刮下裂解产物,拿去4度离心,小心吸取上清就行了

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回复:时间:2016-06-29

展开引用JacquelineLiu请问可以把使用超声碎裂器提取细胞的方法发给我看一下吗?非常感谢!另外,看看这个有没有帮助?http://wenku.baidu.com/link?url=SgeFb3fszuHss8uqw2hvenhShYED7uGh6B5pGKwnqM1YvJpqOY2JqbSGG6qwcIzqssA3WjHxNqwDPzuNtHK1S5CgVJmNeEeRkcbHZDqvm3W......非常不好意思呀,我们实验室没有超市碎裂器,所以我也不知道具体的方法呢,建议你@其他大神试试哈