实验试剂仪器的具体要求见「其他」。

1.培养待标记的细胞至适当的生长期。

生长旺盛的细胞中磷酸盐转运达到最高峰，除非研究静止期细胞的蛋白质磷酸化，一般待标记的细胞生长密度不要达到汇片，标记前3～18h换新鲜的培养液培养将有利于标记。

2.吸去培养液，用37℃的含血清不加标记物的标记培养液洗尽残存的含磷酸盐的培养液，吸尽该培养液。

3.加入预热的标记培养液，加入量为：（0.5～1ml）/35mm培养皿，（1～2ml）/50mm培养皿，或（2～4ml）/100mm培养皿。

4.在树脂玻璃挡板后操作，使用配备塞有棉花防浮质吸管的微量移液器加入³²P至终浓度为0.1～2mCi/ml。

标记1～2h已足够，但细胞可在6h内耐受高达2mCi/ml和在18h内耐受低浓度（0.1～0.5mCi/ml）的辐射。

5.将培养皿置于预热的树脂玻璃盒中，并将盒子置于培养箱中。

6.标记结束时，将装有标记细胞的树脂玻璃盒移至冷室，放在树脂玻璃挡板后面。

7.从树脂玻璃盒子中取出培养皿，用一次性的移液管吸尽标记培养液，培养液和吸头或吸管均作为同位素废物弃置。

8.用2～10ml冷TBS洗涤细胞2次，同步骤7一样吸尽并弃去放射性废物。

9.加适量裂解缓冲液（0.3ml/35mm培养皿，0.6ml/50mm培养皿或1.0ml/100mm培养皿），用橡皮细胞刮子擦刮下贴壁细胞，裂解物留在培养皿上，4℃放置20min。用橡皮细胞刮子将贴壁细胞的裂解液移至培养皿边缘，并将裂解液移入带螺口盖的微量离心管中。

10.盖上管盖，于4℃26000g离心30min澄清裂解液。

11.离心后，将上清（裂解物）移至新离心管中，离心管和沉淀作为同位素污物处理。

12.用凝胶电泳、免疫沉淀或蛋白质纯化方法，分析标记的裂解液，所有过程均在4℃适当屏蔽下进行。