- Cy3标记的兔抗牛IgM南京亿迅生物科技有限公司
- 丙酮氰醇市场调研报告
- 立式压力蒸汽灭菌器灭菌原理
- 【求助】谁能给我提供一份DNA的提取方案 细胞技术讨论版 ...
- cjpi0272的个人空间 ( ゜ ゜)つロ 乾杯~ B...
- ELISA、Western Blot 、免疫组化的具体区别 ...
- 安徽省BVSMCT58CA厂家
- 发布求购,万千商家免费帮你找货
- 老师 您好! 检测碱性磷酸酶活力时,底物溶液是怎么配置的阿?...
- Plastice / Stickere
- 智慧实验室,新材料研发云平台,LIMS,ELN专业云计算平台...
- HEBER FLOWTECH Hydraulic Cyind...
- [07-20]DNA分子量标准
- [10-03]琼脂糖凝胶电泳实验
- [10-02]简述琼脂包埋法的过程
- [07-24]为什么电泳时,点样孔很亮,而下边无条带? 分子生物 PCR相关...
- [08-02]磁珠与琼脂糖珠在免疫沉淀实验使用中的区别 分析行业新闻
- [10-03]琼脂糖(Agarose)的特性有哪些呀?
- [07-22]琼脂糖凝胶电泳详细过程与步骤
- [07-14]琼脂糖凝胶电泳跑成这样是怎么回事 琼脂糖凝胶电泳跑成这样是
- [10-03]琼脂糖凝胶和交联琼脂糖凝胶的区别
从琼脂糖凝胜中回收DNA片段的原则
l、去除DNA样品中的杂质
琼脂糖是从琼脂中提取出来的,其中吉有较多的酸根和羟基多糖。目前大多数级别的璩脂糖中混有硫酸酯多糖,这种物质能抑制基因克隆中使用的多种工具酶的活性,如DNA限制性内切酶、连接酶、激酶及聚合酶。在回收DNA时应尽量减少这些酶抑制剂的污染。不管用哪种方法,回收DNA片段的溶液,要用2.5mol/L醋酸铵和乙醇沉淀再用7。q.乙醇漂洗数次,这样处理,可以很有被地去除一些有害的有机分子和无机盐沉淀。已筏列为实验操作常规。近年来琼脂糖的质量有较大提高,如低融点琼脂糖,不但融点降低到65℃左右,更重要的是,其中DNA工具酶的抑制物含量很少,所以有些低融点琼脂糖可以直接在其溶液中对DNA进行内切酶消化和DNA片段之间的连接反应。
使用离心机分离提取DNA欢迎选用英泰离心机,现在来电咨询,获取最新优惠!
2、提高DNA片段的回收率:
DNA的回收率与DNA片段的大小有一定关系,随着DNA分子量的增大,回收率明显下降.大干20kh时,回收率低于20%。这是由于大的DNA片段与DEAE纤维素纸的结合力强,很难洗脱下来。DNA片段的含量与回收率也有较密切关系,量越少回收率越低,若DNA片段量小于500mg时,几乎很难回收。
回收DNA片段应该注意以下事项:
①提高DNA上样量;
②减小DNA同收时的洗脱容积,若容积过大时,可先用正丁醇进行溶液浓缩;
③正确选择同收DNA片殷的方法。DEAE纤维素纸电泳法适用于500bp到5kb大小的DNA片段的回收;电洗脱法适用于回收5kb以上的DNA片段,低融点琼脂糖回收法较前两类方法的回收率低,但操作简单,甚至加一定缓冲液融化后即可直接进行反应。
================ 蚂蚁淘在线 ================
免责声明:本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容
版权声明:未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘在线”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。