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邻甲酚酞络合酮比色法测定血清总钙实验
| 实验方法原理 | 邻--甲酚酞络合酮是全属洛合指示剂,同时也是酸碱指示剂,在碱性溶液中与钙及镁螯合,生成紫红色化合物。做钙测定时,在试剂中加入8-羟基喹啉以消除标本中镁离于的干扰。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 试剂、试剂盒 | AMP碱性缓冲液 仪器、耗材 | 邻--甲酚酞络合酮显色剂
实验步骤 | 一、实验试剂: l.邻--甲酚酞络合酮显色剂:称取8一羟基喹啉500mg,置烧杯中。加浓HCL15ml,使其溶解并转人500ml容量瓶中,再加入邻--甲酚酞络合酮25mg,待完全溶解后,如Tritonx-10Oml混匀,然后加去离子水至刻度置聚乙烯瓶内保存。 2.lmol/LAMP碱性缓冲液:称取a-氨基-2-甲基-l-丙醇89.14g,置1L容量瓶中,加500ml去离子水溶解待完全溶解加至刻度,置聚乙烯瓶中室温保存。 3.显色应用液:应用时,根据当日标本的多少将上述两液等量混合。 4.钙标准液(2.5mmol/L):准确称取经110℃干燥12h的碳酸钙250mg,地置于1L容量瓶内,加稀盐酸(1份浓HCL加9份去离子水)7ml溶解后,加去离子水900ml,然后用500g/L醋酸铵溶液调PH值至7.0,最后加去离子水至刻度,混匀。 二、实验操作:
如标本混浊、黄疸、浴血、需做校正试验,于空白管及测定管中各加入5g/LEGTA溶液0.05ml再测吸光度,再次读取的吸光度差,即为校正吸光度。 三、计算: 血清钙mmol/L={[测定管吸光度(或校正管吸光度)]/标准管吸光度}×2.5 参考值:成人:2.03-2.45mmol/L 儿童:2.25-2.67mmol/L 注意事项 | 1.用血清或肝素抗凝血浆标本,不能用钙螯合剂(EDTANa2)及草酸盐作抗凝剂的标本。 2.邻--甲酚酞络合酮试剂灵敏度很高,所用试管和器皿如有微量的污染亦会引起测定误差,故此,测定最好用一次使用的塑料管,所用进剂应在聚乙烯瓶内保存。如果条件不允许而用玻璃试管和器皿时一定要经稀盐酸清洗,再用去离子水冲净后方可使用。
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