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植物总RNA的提取实验一研磨法
蚂蚁淘
/发布时间:1533849385 /浏览量:185
| 实验方法原理 | 在液氮中研磨植物材料,使部分细胞破碎,进一步使植物细胞在裂解液中裂解,用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质,异丙醇沉淀核酸,溶解后经氯化锂沉淀总RNA,洗涤后得到高质量的RNA。本实验旨在了解和掌握植物总RNA的分离和纯化方法。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 植物RNA 试剂、试剂盒 | 尿素Tris-HClNa2EDTANaClTris饱和酚SDSLDS醋酸钠氯仿-异戊醇异丙醇TE缓冲液LiCl乙醇 仪器、耗材 | 研钵烧杯离心机
实验步骤 | 取5～10g材料放入研钵中,加入过量液氮,迅速研磨成均匀的粉末(在研磨过程中,保证材料始终浸在液氮中,研磨约30min)。 待液氮自然挥发干净后,将材料转入100ml的离心管中,加入6～8倍体积的裂解液1,轻轻搅拌后,0℃冰浴20min。12000r/min,4℃离心15min。 取上清,加入1/3体积的3mol/L醋酸钠,1/5的氯仿异戊醇,轻轻摇匀,0℃冰浴20min。 2000r/min,4℃离心15 min(加5倍体积裂解液2溶解沉淀以提取DNA)。 取上清,加入等体积冰浴冷却的异丙醇,混匀且冰浴10min。 5000r/min,4℃离心10min,将沉淀溶于5ml含有0.1%SDS的TE缓冲液中,加入8mol/LLiCl使终浓度至2.5mol/L,冰浴3h或4℃过夜。 12000r/min,4℃离心10min。 70%乙醇洗涤沉淀两次,空气干燥10min,溶于无菌水(DEPC焦碳酸二乙酯,处理),加入1/10体积10%的SDS,重复第4～6步骤,进一步除去蛋白质,70%乙醇20℃长期保存。
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