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2021-07-20【求助】丙酮沉淀蛋白后，关于蛋白质溶解的问题。急！

tssunny
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各位大侠：由于本人是初学者，请多多指教。我现在在做血浆蛋白质的分离，样品经丙酮沉淀后，发现用裂解液溶解蛋白质很难溶解。我想能否用超声裂解呢？请各位专家帮帮忙分析分析，十分感谢。
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相关回复

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回复：时间：2021-07-22

我也曾经遇到过这个问题。也用超声裂解过。效果不是很好。我觉得主要问题是蛋白沉淀后不用太干了，干了就很难溶解。

有用（0）

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回复：时间：2021-07-27

是阿，可以在沉淀刚刚形成的时候就溶解，然后要用超声超然后再离心用上清效果还好

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回复：时间：2021-07-31

我也是刚开始做，但是有点经验可以跟大家一起分享一下：）我做完TCA丙酮沉淀后，先用水化液溶解，用枪头吹打一下，然后振荡一下，放在4度过夜，第二天看的时候沉淀基本就溶解了，然后再离心一下，取上清就可以直接用于上样了：）

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回复：时间：2021-07-22

丙酮有残留时蛋白不易溶解，可用电吹风吹干后溶解。电泳前最好离心一下，上清用于点样，未溶解的物质会造成拖尾。

有用（0）

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回复：时间：2021-07-31

谢谢各位的帮助！

有用（0）

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回复：时间：2021-07-21

直接用水化液溶，超声一下，再放在30度的金属浴中，溶的效果会很好的

有用（0）

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回复：时间：2021-07-22

请问什么是金属浴啊！30度的高温蛋白质不会降解吗？

有用（0）

已帮助 0人

回复：时间：2021-07-25

经过有机溶剂沉淀后，有些蛋白就无法溶解了。即使用超声，也只是形成微粒（肉眼未必看见）悬浮在溶液中。

有用（0）

已帮助 0人

回复：时间：2021-07-24

我也是用丙酮沉淀的蛋白，然后用5%的SDS在65℃水浴锅中溶解的，溶解的还可以。但是有一个问题，之前用RIPA裂解液裂解的时候需要加蛋白酶抑制剂，磷酸化酶抑制剂。现在不知道怎么加这个?可以给SDS中加吗？求高手解答

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