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最近在装一根2L的层析柱(50×1000mm)出现了一个问题:
柱子装好后放置过夜总是出现了干柱现象。
我装柱的步骤是:
1、填料清洗(sephacrylS300),最后溶于ddH2O中。
2、空柱清洗加上装柱器,堵住下面的出水口,同时往柱子内灌入100mlddH2O中。
3、灌入填料匀浆。
4、打开下面出水口,用AKTAFPLC缓慢加压至目标反压。
5、堵住下出水口,旋入层析柱上接头并堵住出水口,4度放置。
这样子到了第二天总是出现了干柱的现象,我反复检查了出水口堵头并重装了几次,同样的问题依然出现。
我使用的层析柱是上海锦华层析设备厂的,不知前辈们可有遇到这样的问题,还望赐教!
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回复:时间:2009-10-17
装分子筛柱确实很恼人。看了你程序,估计存在下列可能:1、进出口的堵头密封不严。这个最常见。虽然你已经反复检查了,还是有可能的。出现干柱时,看看进口管是否空了,如果没有液体充满,可能性就更大。极端的检验方法就是,在装柱完毕后,不要用堵头封进出口,而是把进出口浸入到液体中,早上再来看是否干柱。如果还是干柱,那么才可以完全排除堵头的可能性。2、填料和溶液的脱气不知道你的填料清洗用的是什么方法。如果是用滤洗的话,可能胶的内部有空气残留。溶液不经过脱气处理,过夜后也会有气体逸出。一般首选真空抽滤脱气,溶液亦可用超声脱气。3、分子筛装柱程序分子筛装柱一般都有比较严格的装柱程序,最好按照填料的说明书来。S300好像至少有两段不同的流速装柱。你的缓慢加压可能不合程序要求,看看说明书吧。柱子全部装好后,最好用使用流速冲洗柱一段时间,推荐一个柱体积以上。4、柱子问题在这儿绝对不是崇洋媚外,国产柱确实在有些方面大大不如进口柱。例如O型圈、柱玻璃管直径上下的均匀度、柱操作的容易度等。一般对分子筛这种对体系要求较高的纯化柱,最好采用进口柱来装,例如XK50/100(GE)。离子交换柱、亲和层析柱用国产柱问题不大,只要你不用梯度洗脱方式。你的干柱有可能是O型圈与玻璃管贴合得不够好。装柱时可以在柱头密封圈的上方留一段液体看看。
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回复:时间:2009-10-12
通常是温度变化所致,不同的温度气体在其中的溶解度是不同的,在这方面找找原因。填料先在室温平衡至少一天一夜,然后装柱后先在室温放置一夜观察,如果没有变化再把装好的柱子置于4度,你再观察一下就清楚了。
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