- Celetrix细胞电转仪EX(20ul1000ul)性能参...
- 查特低温设备(成都)有限公司
- TE缓冲液:10mM Tris HCl,0.1mM EDTA...
- 张洪彬 云南大学 物理与天文学院
- 大肠杆菌电转化及电转感受态细胞的制备华中农业大学农业微 .....
- 【Lonza4D细胞核转染系统,AMAXA电转仪,X模块图片...
- tpu(热塑性聚氨酯弹性体橡胶)_
- 乒乓球Q&A_
- 慢病毒表达载体pLVXTet 3G pLVXTRE 3G载体...
- SignaGen 品牌介绍及代理商/经销商名单 品牌专区 ...
- 解析:一般自来水厂的混凝试验法和搅拌试验步骤武汉市梅宇仪器....
- DNA和RNA的区别是什么?
- [06-26]想用目的基因转染哺乳动物,可以做稳定转染吗?具体用什么方法? ...
- [01-26]Eppendorf,关于Eppendorf的所有信息 实验室资讯网
- [12-07]险峰光学仪器厂(上海小三线单位)教育高清完整正版视频在线观看...
- [11-08]有人做过CHO细胞的电击转染实验吗?我做的转染效率太低,求高人指点。最...
- [11-09]BTX ECM630电穿孔系统_电穿孔上海珂淮仪器有限公司
- [07-23]Eppendorf Eporator 电转化仪_德国eppendorfEppendorf Eporator_技...
- [05-10]北京六一电泳仪使用说明书及注意事项
- [04-01]电转工具价格报价行情
- [07-22]【求助】请问谁知道哪个实验室有转染细胞的电转仪(北京)。急! ...
电转化法制备大肠杆菌感受态细胞
1.前夜接种受体菌(DH5α或DH10B),挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜;
2.取2ml过夜培养物转接于200mlLB培养基中,在37℃摇床上剧烈振荡培养至OD600=0.6(约2.5-3小时);
3.将菌液迅速置于冰上。
以下步骤务必在超净工作台和冰上操作
4.吸取1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中,在冰上冷却10分钟;
5.4℃下3000g冷冻离心5分钟;
6.弃去上清,加入1500μl冰冷的10%甘油,用移液枪轻轻上下吸动打匀,使细胞重新悬浮;
7.4℃下3000g冷冻离心5分钟
8.弃去上清,加入750μl冰冷的10%甘油,用移液枪轻轻上下吸动打匀,使细胞重新悬浮;
9.4℃下3000g冷冻离心5分钟
10.加入20μl冰冷10%的甘油,用移液器轻轻上下吸动打匀,使细胞重新悬浮;
11.立即使用或迅速置于-70℃超低温保存。
影响感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项:
1.细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株OD600为0.5时细胞密度是5×107/ml);
2.所有操作均应在无菌条件和冰上进行;
3.经CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加,24小时达到最高,之后转化率再下降(这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的);
4.化合物及无机离子的影响:在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子(如Mn2+或Co2+)、DMSO或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高(100-1000倍);
5.所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率;
6.质粒的大小及构型的影响:用于转化的应主要是超螺旋的DNA;
7.一定范围内,转化效率与外源DNA的浓度呈正比。
================ 蚂蚁淘在线 ================
免责声明:本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容
版权声明:未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘在线”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。