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裂解液配方:
尿素7M
硫脲2M
CHAPS4%
二次水至20ml
使用前加DTT至65mM,tris至40mM,PMSF至1mM
上样液配方:
尿素8M
CHAPS2%
1%溴酚蓝0.002%
二次水至10ml
使用前加DTT至18mM,IPGbuffer至0.5%
由于都含有尿素,特别难溶解,好像含有尿素的温度不能超过37度,就在磁力搅拌器上一直搅着,发现过了一两个小时还没溶解,怎么回事么?中间还在34度左右水浴锅里水浴过,还是没溶解,溅在烧杯壁上的液体都已经结晶了。
有人碰到这样的问题么,很着急,急求帮助。
1.裂解液和上样液配方有无问题?
2.尿素怎么老不容,有没有什么方法加速其溶解?
相关回复
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回复:时间:2012-09-09
你配多少裂解液啊?用烧杯配的吗?如果是的话的确有点难溶解,我们一般都是用离心管配的,比如配1ml,那么把所有药品及buffer称好加好后再加水(大约加0.55ml水),然后把管子盖紧,任意混合摇匀即可,一般过5分钟左右就可以了,如果你配5ml的话,可以用5ml的离心管或者其它管子,
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回复:时间:2012-09-08
顺便再问个问题,我的bradford工作液:95%乙醇25ml85%磷酸50ml考马斯亮蓝G2500.05g二次水至500ml发现怎么的都会有一些考马斯亮蓝G250的小颗粒不能溶解,最后用0.45um滤膜过滤了,这样可以么?会影响测定时的吸光值么?
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回复:时间:2012-09-02
展开引用gaogaoaixuefei顺便再问个问题,我的bradford工作液:95%乙醇25ml85%磷酸50ml考马斯亮蓝G2500.05g二次水至500ml发现怎么的都会有一些考马斯亮蓝G250的小颗粒不能溶解,最后用0.45um滤膜过滤了,这样可以么?会影响测定时的吸光值么?......正常的,不必在意
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回复:时间:2012-09-12
过滤就可以了,有的时候尿素质量不好,我也遇到过,同样的浓度,同一家买的尿素,第一瓶就很好溶解,可是我用第二瓶的时候就特别不好溶解,浑浊的也不是沉淀,就是乳白色,然后我过滤后用的,第三瓶同样的浓度就又没事了,澄清的,不知道你是不是遇到不好的尿素什么的了
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回复:时间:2012-09-09
我也是配的10ml的,用的是40ml的离心管,好像是4.8g尿素吧?反正把所有药品都称好,大概加5-6ml水溶解,只要在振荡器上震荡一会就好了,溶了之后差不多就10ml左右再定容。我用的尿素级别也不高的,就是生工的。
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